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广西师范大学
硕士学位论文
罗汉果性别的分子标记研究
姓名:黄姿梅
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:秦新民
20070501
罗汉果性别的分子标记研究

年级:2004 级研究生:黄姿梅导师:秦新民教授
专业:生物化学与分子生物学研究方向:植物基因工程

摘要

罗汉果(Siraidia grosvenorii(Swingle)C. Jeffrey)为葫芦科(Cucurbitaceae)罗汉果属
(Siraitia)的雌雄异株植物,具有重要的医疗和保健价值,是广西特有的经济植物。罗汉
果的栽培需要优良的罗汉果雌、雄品种。对罗汉果进行雌雄性别的分子标记研究,可为罗
汉果早期性别鉴定以及雌雄单株选育提供理论基础。
本研究主要采用随机引物扩增多态性 DNA(RAPD)技术和同工酶方法对罗汉果雌雄株进
行性别分子标记等的研究。研究内容及结果如下:
,用随机引物 S60(GGTCAC),S90
(GTCT)扩增得到与罗汉果雄性性别相关的 DNA 分子标记。根据引物名以及片段大小
将差异带分别命名为 S90-300、S90-400、S60-750。将这三条差异片段回收、克隆及测序,
获得的序列大小分别为 305bp,405bp,746bp。
在 NCBI 数据库中用 BLAST 对这 3 个差异片段进行序列同源性比较,结果表明这 3 个序
列与其它生物体 DNA 序列同源性较小,且同源序列中未发现来自罗汉果或葫芦科的序列,
表明这三个片段为罗汉果中新发现的 DNA 序列。
BLAST 分析表明:S90-300 序列中的 9bp-305bp 与葡萄的基因组序列有 67%同源性;
180bp-220bp 与小鼠 X 染色体上的 41 个核苷酸有 82%的同源性;232bp-260bp 与小鼠 X 染
色体上的 29 个核苷酸有 93%的同源性;201bp-243bp 与人类 X 染色体上的 43 个核苷酸有
81%的同源性;210bp-244bp 与鸡 W 染色体上的 38 个核苷酸有 86%的同源性。虽然均是来
自动物的染色体序列,但 X、W 染色体均为性染色体,因此我们认为 S90-300 序列可能与性
别基因有一定程度的关系。
S90-400 序列与水稻的第 8 条染色体的 29 个核苷酸具有同源性,同源比率为 93%。通
过分析我们认为 S90-400 序列与控制不育性的 QTL 或是标记基因可能有一定的关系。另外,
该序列与鸡 Z 性染色体上的 40 个核苷酸有 87%的同源性,因此我们认为 S90-400 序列可能
与性别基因有一定关系。
S60-750 序列在 102bp-136bp、443bp-480bp 片段位点分别与小鼠 X 染色体上不同位
置的 37、38 个核苷酸有 89%、86%的同源性;在 560bp-584bp 、583bp-610bp 分别与黑猩
猩 X 染色体的 25、28 个核苷酸有 92%、96%的同源性。X 染色体为小鼠、黑猩猩的性染色
体,因此我们认为 S60-750 序列可能与性别基因有较为密切的关系。
(青皮、长滩、冬瓜、红毛)罗汉果雌株为实验材料,通
I
过雄性和雌性罗汉果基因组 DNA 池的 RAPD-PCR 扩增,对 115 个随机引物进行初步筛选,
发现有 8 个引物在雌雄 DNA 池中有差异。经过重复性验证,结果表明:S47(TTGGCACGGG)、
S103(AC)能在雄集群 DNA 池中和单株分别扩增出约 2600bp、1100bp 的雄特异
性条带。而引物 S43(AC)则在所有品种的雌集群 DNA 池扩增出约 650bp 的雌性
特异性条带。本实验为罗汉果性别连锁基因的克隆提供了一定的基础。
EST 同工酶分别分析了暴棚、红毛罗汉果实生苗幼苗叶片,结果每品种 EST
同工酶图谱均可分为两种模式,其中一种可能为雄性模式,另一种可能为雌性模式,结果
有待罗汉果分化出性器官(花)后的最终验证。

关键词:罗汉果;性别;RAPD;EST 同工酶;克隆



























II
STUDIES ON SEX OF Siraidia grosvenorii BY
MOLECULAR MARKER

Grade: 2004 Master Candidate: Huang zim