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离体蛙心灌流
一、目的
在维持离体心脏循环的条件下,观察不同的阳离子(Na、K、Ca);酸、碱及肾上腺素,乙酰胆碱等神经递质对心脏活动的影响,同时记录心输出量与心率的变化。
二、原理
心脏离体后,如用人工灌流法保持其新陈代谢的顺利进行,则心脏仍能有节律地自动收缩和舒张,且可维持较长的时间。离体心脏活动所需的灌流液。应同动物内环境一致改变灌流液的成分,则可引起心脏活动的改变。
三、实验用品
蛙(蟾蜍)、蛙心夹、蛙板、蛙心套管、常规手术器械(蛙)、试管夹、双凹夹、铁支架、小烧杯、滴管、张力换能器。D-95生理记录系统、任氏液、5%NaCl、l%KCl、1%CaCl2、%肾上腺素、%乙酰胆碱、3%乳酸、
%NaHCO3、滴管、棉球、棉线等。
四、方法与步骤
(一)离体蛙心的制备
1、暴露心脏
取青蛙(或蟾蜍)一只,用蛙针从枕骨大孔插入破坏延髓后,仰卧固定于蛙板上,依次剪开胸前区皮肤和肌肉。开胸暴露心脏。然后用镊子提起心包膜,再用虹膜剪刀将其剪破,使心脏完全暴露出来。
2、蛙心插管
用蛙心夹在心舒张期夹住心室尖。将心脏轻轻提起,辨认与心脏相连的诸血管。出入蛙心脏的血管共有九条(左主动脉、右主动脉、左、右前腔静脉、后腔静脉,左、右肺静脉,左、右肝静脉)然后将蛙心夹之连线用胶泥(或胶布)++2+
固定在蛙板上,以便操作。用虹膜剪将连在左肝静脉上的心包膜剪去(注意:不要损伤静脉窦)。用镊子将已浸湿任氏液的一条线穿过左肝静脉的下方,用另一条线穿过左主动脉下面,尽量向远端结扎,并结扎除左主动脉及左肝静脉外的全部血管。左主动脉做输出管(动脉插管)。左肝静脉做输入管(静脉管)插管。
首先用小镊子提起左肝静脉,用虹膜剪刀朝向心端剪一“V”型切口,把盛有任氏液的蛙心静脉从此插入,注意勿损伤静脉窦。用线结扎固定。冲洗心脏,洗净余血。再翻正心脏,在左主动脉上离动脉圆锥1厘米处,朝向心端剪一“V”形切口,将蛙心动脉插管插入,用线结扎固定。观察心脏每次收缩有无液体从动脉插管内流出,如果能顺利地滴出液体,则可从结扎线外将前、后腔静脉、主动脉等九条血管剪断,使心脏脱离蛙体,将动脉插管与静脉插管合起来,使由动脉流出的液体流入静脉插管内,如此形成离体循环系统。用任氏液反复冲洗静脉插管,直到将心脏内残留的血液完全洗出。灌流液呈无色透明为止。-,在整个实验过程中保持液柱的高度不变,然后稳妥地固定在铁支架上,再把蛙心夹的连线连接在肌张力传感器上,再将传感器与微机(接口第四通道)相连。
(二)操作方法
将仪器连接好后,打开主机电源启动计算机,进入主菜单点击“生理”选项,进入生理实验第二级菜单,双击蛙心灌流图标即进入实验模块。点击采样钮或“记录”钮。
采样:点击记录钮
或采样钮(选择连续采样),此时计算机可自动无间断地记录由第四通道采集的信号,点击
或
可调节“走纸”速度,走纸速度太快,不利于看清
波形幅度及频率的变化,走纸太慢则看不清波形。在采样期间记录的数据将自动存盘。
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