流式细胞仪操作.pptx

BD FACS Aria 1
Beckman MoFlo Astrios
BD Calibur
我们拥有的流式细胞仪
Beckman Gallios
一、光源
二、流动室
三、软件分析系统
流式细胞仪的组成
1. 激光
目前最高的配置是7激光, 355nm 、405nm、 457nm 、488nm 514nm、 561nm 、633nm (Dream)
355nm Side Population (SP)必须滴
405nm 免疫多色分析 PACIFIC BLUE Brilliant violet(405)
457nm 染色体分选
488nm GFP Alex488 PE PE-CY5 PE-CY7 TEX-RED Percp5-5 ….
514nm YFP
561nm Mcherry PE 最佳的激发波长
633nm APC APC-CY7 Alexa 647
2. ***灯
现在用的比较少了,比较大的缺点是能量比较低
光源
流式细胞仪的光信号
散射光信号
荧光信号
----前向角散射光(FSC,Forward Scatter)
入射激光的同向散射光信号,反映了细胞相对大小及其表面积
---- 侧向角散射光(SSC, Side Scatter)
入射激光90角的散射光信号,反映了细胞粒
度及细胞内相对复杂性
荧光素吸收激光能量后将吸收能量释放,转换为振动能和热能释放较入射光波长更长的光量子
前向角散射光—FSC
Forward angle light scatter
FALS
FALS Sensor
Laser
侧向角散射光—SSC
FALS Sensor
90LS Sensor
Laser
FSC-SSC Application
What can we read from this fsc-ssc dot plot?
从左往右细胞越来越大,反应细胞直径
—SSC 图能够帮助大家判断细胞的相对大小,细胞越大FSC的电压值越小
,反应被测细胞的细胞膜、细胞质、核膜的折射率和细胞内颗粒的性状
荧光是怎么产生的呢?
510nm-530nm
阴性细胞为何有峰图?
FITC
Alexa
488
Alexa
488
Synthetic, organic dyes:
Alexa Fluors, Cy dyes, Horizon, Dylight, etc
Proteins:
PE, APC, GFP, mCherry
Semiconductor nanocrystals: Qdots, Crystalplex, eFluorNC
Organic polymers:
Brilliant VioletTM
High-Sensitivity Fluorescence™
Alexa
488
fluorescent chemistry families
coumarin
tryptophan
350
Pacific Blue
Alexa 488
FITC
Alexa 568/ rhodamine
Texas Red
Cy7
Organic fluorophores