临床分子生物学检验复习提纲.doc

--------------------------校验:_____________-----------------------日期:_____________临床分子生物学检验复****提纲临床分子生物学检验DVA的一级结构是由哪种化学键连接?两条单链间:碱基氢键;相邻碱基间:范德华力;脱氧核苷酸间:3’-5’磷酸二酯键可以出现在人体循环系统中的游离核苷酸是?脱氧核苷酸,核糖核酸原核生物DNA的复制方式是?θ型半保留复制核小体结构中的组蛋白是哪些蛋白?各自的作用有?H2A、H2B、H3、H4:核心颗粒,形成核小体。H1:连接线上,锁定核小体、参与包装PCR体系中抑制Taq酶活性的物质有哪些?过量加入什么会减少Mg2+浓度导致Taq酶活性降低?游离的Mg2+浓度;dNTP、引物和模板DNA等中的磷酸基团,螯合剂如EDTA均可与镁离子结合减少Mg2+浓度。PCR扩增时,链的延伸从什么地方开始?对于引物是哪一端?模板链呢?从引物的3’端开始,方向5’到3’;模板DNA序列的3’端;3’端在波长260nm的紫外线下,A值=1时双链DNA的浓度大约相当于?50ug/ml的双链DNA。(40ug/ml的单链DNA或单链RNA,33ug/ml的单链寡聚核苷酸)(紫外分光光度法,核酸浓度的鉴定)计算公式:双链DNA=50×A260样本×稀释倍数÷1000(ug/ul)单链DNA/RNA=40×A260样本×稀释倍数÷1000(ug/ul)单链寡聚核苷酸DNA=33×A260样本×稀释倍数/1000(ug/ul)关于基因的定义正确的是?能编码有功能的蛋白质多肽链或合成RNA所必需的全部核酸序列,是核酸分子的功能单位。是遗传的结构和功能单位。一个基因大都包括编码蛋白质多肽链或RNA的编码序列,保证转录和加工所必须的调控序列(启动子,增强子),5’端、3’端非编码序列。β—地中海贫血患者的基因缺陷主要是?基因突变中的点突变有很高的耐热稳定性酶量增加使反应特异性下降,酶量过少影响反应产量;TaqDNA聚合酶无3´→5´外切酶活性,因而无校正功能,在复制新链的过程中会发生碱基错配;TaqDNA聚合酶在每次循环中产生的移码突变率为1/30000,碱基替换率为1/8000,因此扩增的片段越长,错配的机率越高。实时荧光定量PCR技术中非特异性荧光染色技术??限制性片段长度多态性(RFLP);短序列重复序列(STR);单核苷酸多态性(SNP)???原核生物细胞中只有1种RNA聚合酶,可参与合成mRNA、tRNA和rRNA。RNA聚合酶催化聚合反应时需要Mg2+或Mn2+。该酶无校正功能。PCR反应的特异性取决于?引物DNA的变性是指?在某些理化因素作用下,DNA双链解开成两条单链的过程。变性后其它理化性质变化:增色效应 粘度下降比旋度下降浮力密度升高酸碱滴定曲线改变 ?(1)DNA聚合酶(2)拓扑异构酶::兼具内切酶和连接酶活力,能迅速将DNA超螺旋或双螺旋紧张状态变成松驰状态,便于解链。(3)DNA解链酶(4)单链结合蛋白(SSB):结合在解开的DNA单链上,防止重新形成双螺旋。(5)引物酶和引发体:启动RNA引物链的合成。(6)DNA连接酶第一个分离到的抑癌基因是?视网膜母细胞瘤基因(Rb基因)镰状细胞贫血症核酸的分离和纯化中,沉淀DNA的常用试剂是?常用的有机溶剂有:乙醇、异丙醇、聚乙二醇常用的盐类有:醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、***化钠、***化钾、***化镁等。通过紫外分光光度法可对核酸纯度进行鉴定,怎么鉴定?反过来是否成立?否通过A260与A280的比值来判断有无蛋白质的污染。在TE缓冲液中:【注意事项:(1)蛋白质及酚的污染均可使比值下降,可通过蛋白质在280nm的高吸收峰与酚在270nm的高吸收峰来鉴别。,可以采用基因诊断的方法是?直接诊断:Southern印迹技术多重PCR技术PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)等位基因特异性寡核苷酸(ASO)DNA芯片技术(DNAchip)单链构象多态性(SSCP)变性梯度凝胶电泳(DGGE)DNA序列分析(DNAsequencing)(通常指Ⅱ类)特点是?(Ⅱ类限制性核酸内切酶识别序列特点)TAGG切口:平端切口--平末端粘端切口--粘性末端【同功异源酶:来源不同的限制酶,能识别和切割同一位点。同尾酶:有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同,但切割DNA后产生相同的粘性末端】例如:淀粉液化芽胞杆菌(Bacill