鼠疫病原学检验的实验室质量控制.pptx

鼠疫病原学检验试验室质量控制
宁夏疾病预防控制中心
人畜共患病试验室
4月1日
鼠疫病原学检验的实验室质量控制
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鼠疫病原学检验试验室质量控制
质量控制定义
鼠疫病原学检验质量控制方法
鼠疫病原学检验方法
动物间化技能培训
继续教育
人员与组织管理
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室内质控
性能试验
正确贮存
无菌试验
诊疗试剂盒(噬菌体等)
培养基量
pH值
试剂质量控制
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室内质控
生物安全柜
显微镜
高压锅
离心机
培养箱
冰箱
仪器设备
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鼠疫病原学检验质量控制方法
设置参比试验室
发质控物进行检验评价
定时举行各级培训班
派观察员到试验室进行检验指导
室间质控方法
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室间质控普通检验项目
试验室布局
SOP制订及执行情况
试验室安全防护和污染物处理
室内质控执行情况及各种纪录
发放模拟标本(菌种)，要求时间内反馈至上级业务单位
以pH值、软硬度、鼠疫菌生长数量(活菌数)等为综合指标对培养基进行质控和用已知菌对噬菌体进行质控
盲点试验，模拟标本混入监测标本常规测定
对结果进行评价，分析错误原因
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鼠疫病原学检验方法
鼠疫病原学检验的实验室质量控制
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鼠疫病原学检验方法
染色镜检
培养特征
噬菌体裂解
动物试验
基因检测
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鼠疫病原学检验方法
鼠疫病原体
发觉：1894年，在香港，日本学者北里柴三郎和法国学者亚力山大耶尔森二氏。
分类位置：肠杆菌科耶尔森菌属。
生物学特征
分子生物学特征：6MD、45MD、65MD三种质粒；当前已知IS100、IS285、IS1541、IS1661四种插入序列，分布于鼠疫菌质粒染色体基因组中。
毒力决定因子:F1抗原，VWa抗原， Pstl， Pgm
分型:古典、中世纪、东方、田鼠变种四个生物变种； 5个群（A、B、C、D、E群），21个生态型。
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染色镜检
革兰氏染色
美兰染色
经典鼠疫菌是短而粗、两端钝圆、两极浓染椭圆形小杆菌，革兰氏染色阴性。
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细菌培养
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病原学
在普通培养基上28－30℃经24h，肉眼可见形成薄薄一层淡灰色小菌落,圆形，有光泽，中心稍突起。透过光线呈灰白色或淡青色，菌落较干燥，镜下：中央隆起中心发暗，有粗糙颗粒（黄褐色）周围有薄而透明花边，呈锯齿状。
培养特征
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EV

耶尔森菌属三个致病菌形态比较
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噬菌体裂解试验
28－30℃ 24h噬菌带显著
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观察1-9天，能够从感染动物体内检出鼠疫菌为阳性。
动物试验
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鼠疫菌基因检测
病
原
学
检
测
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DNA提取
水煮法提取可疑鼠疫菌DNA
对于脏器标本，在强毒试验室以无菌手续取动物各种脏器(心、肝、脾、肺)约1g，加入到等量生理盐水中，研碎，100℃水浴中煮沸10min，离心，取上清直接用作PCR模板
对于培养可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于装有500ul蒸馏水（生理盐水），于沸水浴中煮10min，离心上清液中含有可疑鼠疫菌DNA作为PCR模板。
细菌基因组DNA提取试剂盒提取鼠疫菌基因组DNA
操作方法可依据试剂盒说明书进行操作。
鼠疫菌基因检测
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体系配制
PCR-buffer
dNTP
引物（2对各1ul ）
Taq DNA聚合酶
模板
纯水
总体积25ul

2ul
4ul
1ul（)
1ul

鼠疫菌基因检测
鼠疫病原学检验的实验室