产内切葡聚糖酶芽孢杆菌C36筛选及基因克隆、序列探究.pdf

四川农业大学
硕士学位论文
产内切葡聚糖酶芽孢杆菌C-36筛选及基因克隆、序列分析
姓名:高凤菊
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:陈惠
20060601
产内切葡聚糖酶芽孢杆菌��筛选及基因克隆、序列分析摘要以羧***纤维素钠为唯一碳源,从废泥浆中经反复筛选及刚果红鉴定,获得一株高活力产内切葡聚糖酶芽孢杆菌。经研究发现,在培养��螅�晕⒕迪拢��锢际�染色为阳性。细胞杆状,细胞大小�.��.�����~�����醒挎撸�猩�或近中央生,芽孢大小�.��.��������.����言残位蛑�危�吣也慌�大。细胞成对或成链,具圆端,运动性较强。将此菌株���肟莶菅挎吒司�曜季����进行了参比试验,初步鉴定该细菌为枯草芽孢杆菌。在���平板上菌落呈乳白色,粘稠厚重,湿润光亮,生长迅速,��杉�飨酝该魅ΑI�ぬ跫�牟舛ㄏ允�该菌生长�范围较宽,在���生长最好,在����~��的碱性条件下长势较好。摇瓶发酵粗酶液的性质测定表明,该菌所产生的内切酶在���左右酶活最高,酶活力为�.�/�。在���时仍能保持最高酶活力的�%以上。酶反应的适宜温度为�。��适宜中性至碱性。根据国际基因库�����凶⒉岬哪谇衅暇厶敲富�蛐蛄猩杓屏艘�铮��过对内切葡聚糖酶基因��┰龇从μ跫�挠呕��竦昧艘惶醭ぴ�.��奶匾煨���┰鎏醮��⒍云浣�辛司�銹�鉴定。然后将��┰銎�峡寺〉絧��.�质粒中,构建含有目的基因片断的克隆质粒,并转化到���甏蟪Ω司�靥逯校�筛选获得阳性克隆菌株。克隆质粒中外源片断的��蛄胁舛ū砻鳎�闷�虾�心�切葡聚糖酶基因的完整序列,内切葡聚糖酶基因全长���,编码��霭被�帷�将�畇����一�内切葡聚糖酶基因序列在����械锹剑�锹胶盼狣�����枯草芽孢杆菌���肫渌�挎吒司�谇衅暇厶敲富��序列号为:���.�琗����,����.�琗����,����.�的同源性高达�%~�%,编码的氨基酸序列�蛄泻盼#篊����珻����珹����珹����珹����同源性高达�%~�%。利用在线生物信息学数据库及生物软件对本基因进行信号肽序列、�欢颂腔��坏恪⒚苈胱拥钠ò�缘确治觯�⒍云涠�督峁购腿��峁菇�辛�关键词枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因克隆序列分析预测。四川农业大学生物化学与分子生物学专业��级硕士研究生学位论文�
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鬣:瑰州“月矽日研究生签名.、钢萄渺知易�酰�导师签名:—酣罗/加《年刍黾****论文独创性声明关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意�腏�农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。
第一章文献综述���基本物质来源。其中�%以上为木质纤维素类物剧�,其中的纤维素是地球上最丰富的在自然界中,许多霉菌瞪】和细菌【�慷寄懿��宋�孛福��泄叵妇�宋�孛傅谋ǖ���纤维素植物体内,它们的含量由于植物种类的不同以及在同一植物的不同部位而不同,具体见表��。资