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大肠杆菌紫外诱变实验
【实验目的】 初步掌握诱变方案的设计和紫外诱变的实验手段。理解自发突变和紫外诱变的机
理，分 析不同诱变目的、诱变手段和诱变筛选在诱变应用中的关系。了解诱变育种在微生物工业中
的作用。度、温度适应、产孢子等方面不能产生过多不适应生产
的变化。
在充分考虑了实验的工作量要求后结合本实验室的人力、物力和时间要求提出诱变和筛选方案。
在筛选方法选择中要考虑到兼顾筛选色工作量和可信度。当筛选方法可信度高时，往往检测方法是比
较繁琐的（尤其是涉及一些蛋白质或氨基酸含量变化的突变类型）。这时为了提高筛选工作量往往降
低筛选的可信度，减少筛选的繁琐程度，而在复筛中进一步加以确定。根据筛选目的和实验室条件选
用合适的诱变剂。筛选方案确定后，不要经常改变，保持工作的稳定性，这样有利于总结提高。
本实验以大肠杆菌为材料，选择紫外线为诱变剂，进行诱变处理：筛选青霉素抗性菌，绘制致死
曲线并计算诱变率。【实验用具及材料】
大肠杆菌（Escherchia coli）
BP 培养基（牛肉膏蛋白胨培养基），见附录 I。 青霉素 BP 培养基，见附
录 II。 生理盐水，见附录 III。
培养皿、三角瓶、离心管、试管、吸管、取液器、台式离心机、水浴锅、紫外线照
射箱 等。
【实验方法及步骤】

（1）细菌培养：接种 E. coli 到 BP 液体培养基（500mL 三角瓶装 100mL 培养基），置 370C、200r/min
培养 16-18h，这时摇瓶中的菌液密度为 107-108 个菌/mL。
（2）收集菌体：将三角瓶中的菌液转入离心管中，4000r/min 离心 10min。离心后，倒去上清液，
加入 100 mL 无菌生理盐水溶液和玻璃珠将细菌沉淀打匀，待用（取用之前务必摇匀）。

（1）菌液稀释：取三角瓶中的菌液 mL，采用 10 倍稀释法，稀释到 10-4-10-6 。
（2）平皿涂布：分取 3 个稀释度的菌液各 mL 加入 BP 固体培养基平皿中，用无菌涂棒将菌
液涂匀。每个稀释度涂布 2 个平皿。将平皿置于 370C 培养箱中。培养过夜。
（3）细菌统计：对培养后的平皿进行活菌统计，依照附录 IV 中的统计原则进行统计，算出原菌
液中的菌密度。
取三角瓶中 mL 菌液加入到含有青霉素