DNA的粗提取与鉴定_实验报告.ppt

DNA DNA 的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定一、基础知识一、基础知识(一)提取(一)提取 DNA DNA 的的方法方法 1 1、提取、提取 DNA DNA 的基本思路的基本思路利用利用 DNA DNA 与与 RNA RNA 、、蛋白质和脂质等在物理和化蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取学性质方面的差异,提取 DNA DNA , ,去除其他成分去除其他成分 2 2、、 DNA DNA 的溶解性的溶解性 DNA DNA 和和蛋白质等其他成分蛋白质等其他成分在不同浓度的在不同浓度的 NaCl NaCl 溶溶液中溶解度不同液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使盐浓度就能使 DNA DNA 充分溶解,而使杂质沉淀, 充分溶解,而使杂质沉淀, 或者相反或者相反①根据 DNA 在NaCl 溶液中的溶解度曲线图, 思考在什么浓度下, DNA 的溶解度最小? DNA 在NaCl 溶液中的溶解度是如何变化的? ①①根据根据 DNA DNA 在在NaCl NaCl 溶溶液中的溶解度曲线图, 液中的溶解度曲线图, 思考在什么浓度下, 思考在什么浓度下, DNA DNA 的溶解度最小? 的溶解度最小? DNA DNA 在在NaCl NaCl 溶液中的溶液中的溶解度是如何变化溶解度是如何变化的的? ? DNA 在 NaCl NaCl 溶液中的溶解度曲线图溶液中的溶解度曲线图在NaCl 溶液浓度低于 mol/L 时, DNA 的溶解度随 NaCl 溶液浓度的增加而逐渐降低;在 mol/L 时, DNA 溶解度最小;当 NaCl 溶液浓度继续增加时, DNA 的溶解度又逐渐增大。②如何通过控制 NaCl 溶液的浓度使 DNA 在盐溶液中溶解或析出? ②②如何通过控制如何通过控制 NaCl NaCl 溶溶液的浓度使液的浓度使 DNA DNA 在盐溶液在盐溶液中溶解或析出? 中溶解或析出? 当***化钠的物质的量浓度为 2 mol /L 时, DNA 的溶解度最大,浓度为 0. 14 mol /L 时, DNA 的溶解度最低。利用这一原理,可以使 DNA 在盐溶液中溶解或析出。 DNA DNA 不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将 DNA DNA 与蛋白质进一步分离与蛋白质进一步分离 3 3、、 DNA DNA 在在酒精溶液中的酒精溶液中的溶解性溶解性 4 4、、 DNA DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性①①蛋白酶能水解蛋白质,但是对蛋白酶能水解蛋白质,但是对 DNA DNA 没有影响没有影响②②大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受 60 60 - - 80 80 ℃℃的高温,而的高温,而 DNA DNA 在在 80 80 ℃℃以上才会变性以上才会变性③③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜, ,去除脂质和去除脂质和蛋白质蛋白质, ,但对但对 DNA DNA 没有影响没有影响 5 5、、 DNA DNA 的鉴定的鉴定 DNA DNA 与与二苯***(沸水浴) 二苯***(沸水浴) 会染成会染成蓝色蓝色,因此, ,因此, 二苯***可以作为鉴定二苯***可以作为鉴定 DNA DNA 的试剂的试剂二、实验设计二、实验设计(一)实验材料的选取(一)实验材料的选取 1 1、材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、、材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取 2 2~ ~3 3种实验材料) 种实验材料) 2 2、原则:凡是含有、原则:凡是含有 DNA DNA 的生物材料都可以考的生物材料都可以考虑,但选用虑,但选用 DNA DNA 含量相对较高的生物组织,成功含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大的可能性更大动物细胞的破碎较易,例如,在鸡血细胞液中动物细胞的破碎较易,例如,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可滤后收集滤液即可(二)破碎细胞,获取含(二)破碎细胞,获取含 DNA DNA 的滤液的滤液 1 1、动物细胞、动物细胞答:蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体, 答:蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体, 水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂( (细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂) ),从而释放出,从