干细胞基础与临床应用基础研究归纳.ppt

干细胞基础与临床应用基础研究归纳.ppt干细胞基础与应用基础研究
广西医科大学研究生选修课课程
组胚教研室 陈维平
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内容安排
一、理论课
1、细胞体外培养基本技术和方法讨论
2、干细胞的分离与培养
3、胚胎干细胞
4、成体（组织）干细胞
5、讨论交流
二、实验课
1、干细胞的分离、培养与观察
三、考核
内容：设计一份完整的“XX干细胞培养的基本方法（流程）”
时间：2014年1月
干细胞基础与应用基础研究
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干细胞基础与应用基础研究（一） 细胞体外培养基本技术和策略讨论
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（一）基本概念 1
体外培养 (In vitro culture)
对象：细胞（特定条件下、单一细胞成份）
组织
器官
胚胎（全胚培养 Holo-embryo culture）
条件：体内生存环境的模拟
（天然优化环境～人工环境）
目的：1、建立活体结构成分在体外生存、生长的
适宜环境
2、应用
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（一）基本概念 2
体内培养(In vivo culture)
方式：移植（Transplantation）
条件：异体相似环境
优点：最大限度模拟自然生长环境
目的：分化研究、临床治疗、特殊
目的（如珍贵细胞株污染的处理）
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（二）基本条件（模拟）
营养条件的模拟
水： 无机盐： 葡萄糖： 维生素：
氨基酸：
细胞因子(Cytokine) ：未知因素
理化条件的模拟
温度： 液体渗透压： 氧与酸碱度：
细胞之间的相互关系： 培养基的选择
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一、水
细胞及机体内环境～溶解或分散状态离子和/或分子的水溶液（化学基础）
水的重要性质：
惰性～大多数物质溶于水而不发生化学反应。
热稳定性和导热性。
表面张力等等：表面张力是维持细胞形态的重要条件。
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二、无机盐
存在形式：离子状态为主 结合（蛋白质或脂质）
形成与维持培养液的晶体渗透压
对细胞功能活动的支持作用
细胞和组织类型不同，对无机盐的要求也不同
实验目的不同，对培养基中无机盐的要求也不同
实验步骤的目的不同，对培养基中无机盐的要求也不同
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三、理化条件 1
温度：35～37 ℃ 细胞对低温耐受能力强过高温
1、应该对实验有全过程的考虑
2、高温的结果是一样的
3、低温条件下细胞活动减缓至停止
4、对低温的耐受能力与细胞类型、个体年龄等因素有关
5、低温的危害与细胞内外冰晶形成的不均衡有关，故降温应该是缓慢的，避免冰晶形成；复温应该是快速的。
液体渗透压：正常血浆 280～310 mOsm/kg；
（主要由晶体渗透压构成 胶体渗透压〈 mOsm/kg）
酸碱度： ～
耐受范围 ～；
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三、理化条件 2
细胞之间的相互关系：
1、从组织水平的认识 细胞是结构和功能的基本单位，而组织是细胞的存在形式。
2、从细胞水平的认识
；膜表面分子结合
；胞间间隙连接
；生物因子传递
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