猪血栓烷素B2(TXB2)酶联免疫分析.docx

猪血栓烷素B2(TXB2)酶联免疫分析.docx:..猪血栓烷素B2(TXB2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书木试剂盒仅供研究使用。96T3ng/L-120ng/L使用目的:本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样木屮血栓烷索B2(TXB2)含量。实验原理木试剂盒丿“川双抗体夹心法测定标本屮猪血栓烷素B2(TXB2)水平。用纯化的猪血栓烷素B2(TXB2)抗体包被微孔板,制成I占I相抗体,往包被单抗的微孔屮依次加入血栓烷素B2(TXB2),再与HRP标记的血•栓烷索B2(TXB2)抗体结合,形成抗体■抗原■酶标抗体复合物,经过彻底洗涤麻加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血栓烷素B2(TXB2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品屮猪血栓烷素B2(TXB2)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlXl瓶8标准品(240ng/L),提取按相关文献进行,提取后应尽快迸•行实验。若不能马上进行试验,可将标木放于・20°C保存,但应避免反复冻融2・不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。:木试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管屮进行稀释。120ng/L5号标准品150卩1的原倍标准品加入150山标准品稀释液60ng/L4号标准品150卩1的5号标准品加入150卩1标准品稀释液30ng/L3号标准品150pl的4号标准品加入150|il标准品稀释液15ng/|^:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余备步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卩1,待测样品孔屮先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10卩1(样品报终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。:用封板膜封板后置37°C温育30分钟。::小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。:每孔加入酶标试剂50卩1,空白孔除外。:操作同3。:操作同5。:毎孔先加入显色剂A50pl,再加入显色剂B50pl,轻轻震荡混匀,37°:每孔加终止液50』,终止反应(此时蓝色立转黄色)。:以空白空调零,450nm波长依序测最备孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程