第七章 重组与鉴定 2014.ppt

目的基因的获取基因载体的选择与构建目的基因与载体的拼接重组子导入受体分子外源基因的表达和产物的分离第七章基因的重组与转移过程切接转增检一、DNA的体外重组(切与接)?同种内切酶产生的粘性末端的连接?同尾酶生产的粘性末端的连接?不同粘性末端的连接?人工粘性末端的连接?粘性末端的更换?重组率(1)同种内切酶生产的粘性末端的连接5'5'TTAAGEcoRI5'GCTTAAAATTCG5'5'GCTTAA5'5'AATTCG5'退火GCTTAAAATTCG5'GCTTAA5'AATTCGT4-TTAAG5'5'TTAAG(2)同尾酶生产的粘性末端的连接BamHI5'5'GTACTAG5'5'GATCAT5'5'TGATCAACTAGT5'5'TACTAGGATCA退火T4-ACTAGG5'5'TAGT(3)不同种酶产生的粘性末端的连接?用两种限制性内切酶分别消化载体和外源DN***段,,在连接酶的作用下相同的粘性末端可退火形成重组DNA分子,实现DNA定向连接.(4)不同粘性末端的连接BamHI5'5'G5'5'CTGCAG5'GACGTC3'T4-GCTAGG5'TAGC5'CTGCAGGACGTC5'PstI3'T4-DNApol切平5'CG5'GCKlenow补平5'5'CTAGG5'5'(5)人工粘性末端的连接5‘突出末端5'G5'5'GCTTAA5'5'5'AATTCG5'5'TAGG5'GAATTCTTAA5'5'5'TAGGGGGGGTTAAG退火BamHIBamHIEcoRIBamHI(6)人工粘性末端的连接3‘突出末端CTGCA3'GG3'ACGTC5'GCATG3C5'C3GTACGT4-GTACGCTGCAGGGGGG3'GG3'GGGGGGACGTC5'5'GTACG5'5'GTACGKlenowPstISphI