禽流感病毒NS1蛋白对细胞的影响.pdf.pdf

生物工捍学报,;:—
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禽流感病毒蛋白对细胞的影响
赵莉霞,张莹莹,杨志新,许龙,杨予涛,于孟斌,王荣,周晓巍,黄培堂
军事医学科学院生物工程研究所蛋自质工程实验室,北京
摘要:蛋白为流感病毒非结构蛋白,只在病毒侵入宿主细胞后产生。目前蛋白对细胞整体水平上的作用仍不
清楚,为了解蛋白在病毒感染细胞中的作用,构建了重组质粒—并将其转染细胞,利用双向电
泳技术检测了受蛋白调控的宿主蛋白,以期从蛋白质组水平上研究禽流感病毒与宿主细胞间的相互作用。同时,还
检测了转染对细胞增殖和细胞周期的影响。结果显示,在细胞中的表达,能够明显引起宿主细胞代谢的变化,
并通过阻滞细胞周期的正常进行而减缓细胞的增殖。
关键词:蛋白,宿主细胞,双向电泳,细胞增殖,细胞周期

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禽流感的广泛流行不仅给养禽业及相关产业造蛋白有个功能区:位于端的结合区和位于
成巨大的经济损失,而且禽流感可感染人类并致人端的效应区。与结合发挥以下作用:与
死亡。我国自年月发生了首例人感染禽流结合,抑制的运输。;与
感以来,迄今为止共发生了例确诊病例,其中死结合,抑制—的剪接;与结合,
亡例,病死率.% 阻断的活性;与端的结合,刺激病毒
蛋白是具有~个氨基酸的禽流感病的翻译.。效应区与不同蛋白分子结合具有
毒非结构蛋白,其序列在病毒株系间有差异。以下作用:与结合抑制的活化;与
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赵莉霞等:禽流感病毒蛋白对细胞的影响
和结合抑制干扰素的生成’;与. 方法
结合活化信号通路。蛋白还具有诱导. 基因的获得及表达载体的掏建
细胞凋亡和抑制细胞凋亡的双重作用。,表所列
蛋白在流感病毒复制早期大量表达,提示序列为正反向引物,扩增基因。分别在上游引
这种蛋白在流感病毒复制及与细胞蛋白的相互作用物中加入和限制性酶切位点。用及
中发挥着重要作用。目前认为,血凝素和神经氨酸双酶切产物和载体,电泳纯化
酶两种蛋白在流感病毒感染细胞过程中发挥关键作并回收基因和线性化的载体, 连接酶
用,而蛋白则决定了病毒在宿主细胞内的破坏连接过夜。连接产物转化大肠杆菌,。
作用。因此,研究蛋白与宿主细胞的相互作用, 培养后,挑取单菌落进行鉴定并测序。测
对阐明病毒引起疾病的机理具有相当重要的作用。序正确后,提取重组质粒,一。保存备用。
本研究中利用双向电泳技术和相关细胞生物学技术, 表扩增所用的引物及其序列
检测了蛋白的表达对宿主细胞代谢、增殖和周
期的影响,为进一步研究禽流感病毒与宿主相互作


用机制打下基础。气



材料与方法
. 细咆培养
. 材料
细胞用含%的’培养基,
. . 菌株和嗫粒
、和细胞用含% 的
大肠杆菌及质粒、—
培养基,培养于。、%温箱。
由本实验室保存。来源于////
. 细跑转染与收集
毒株基因的重组质粒—一由
使用脂质体。进行细胞转
本室张传福构建。