青杄转录因子PwHAP5及其编码基因与应用的制作方法.docx

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因的表达量显著高于阴性对照(阴性对照是野生型对照及下述的空载体对照)。三、种子萌发试验本实验设置以下两个对照野生型对照为转入任何质粒的野生型拟南芥(Col-O);空载体对照按照获得T3代转入重组表达载体pBI121-PwHAP5的转基因拟南芥的方法,将空载体PBI121转入野生型拟南芥中,然后进行继代培养得到T3代转pBI121的转基因拟南芥。1、高盐条件下的种子萌发实验取野生型拟南芥、空载体对照和上述T3代转入重组表达载体PBI121_PwHAP5的转基因拟南芥的种子,在MS培养基上进行种子萌发实验,其中培养基中含不同Nacl浓度(分别是75mM、100mM、150mM和200mM),实验条件是光周期为16小时光照,8小时黑暗;光强为300-400umol/M2/S;光照条件下的温度为22_24°C,相对湿度为70-90%;黑暗条件下的温度为18-20°C,相对湿度大于90%。在第7天统计种子萌发率,实验重复3次,测定结果如图3和图4所示(WT表示野生型拟南芥,T表示转入重组表达载体PBI121-PwHAP5的转基因拟南芥;空载体对照和野生型对照的表型一致,故图中未显示空载体对照),T3代转入重组表达载体PBI121-PwHAP5的转基因拟南芥的种子在培养基中Nacl浓度为75mM、100mM、150mM和200mM时的萌发率显著高于野生型对照和空载体对照的种子萌发率。2、甘露醇模拟干旱胁迫条件下的种子萌发实验取野生型拟南芥、空载体对照和上述T3代转入重组表达载体PBI121_PwHAP5的转基因拟南芥的种子,在MS培养基上进行种子萌发实验,其中培养基中含不同甘露醇浓度(分别是0、100mM、200mM、300mM和400mM),实验条件是光周期为16小时光照,8小时黑暗;光强为300-400umOl/M2/S;光照条件下的温度为22_24°C,相对湿度为70-90%;黑暗条件下的温度为18-20°C,相对湿度大于90%。在第7天统计种子萌发率,实验重复3次,测定结果如图5所示(WT表示野生型拟南芥,T表示转入重组表达载体PBI121-PwHAP5的转基因拟南芥;空载体对照和野生型对照的表型一致,故图中未显示空载体对照