分枝杆菌噬菌体的分离纯化及生物学特性研究.doc

噬菌体Legendre的生物学特性及抗耐药结核潜力的初步研究
刘平邬亭亭彭丽郭述良* 罗永艾(重庆医科大学附属第一医院呼吸科,重庆 400016)
[摘要] 目的研究噬菌体Legendre的生物学特性并初步探索其用于抗耐药结核的潜力。方法双层平板法制备Legendre的噬菌斑,观察其特点,纯化噬菌体,电镜观察Legendre形态;提取Legendre基因组,限制性内切酶酶切分析确定其核酸类型;以不同感染复数扩增Legendre,找出最佳MOI和最小MOI;通过一步生长实验找出Legendre潜伏期、裂解期和裂解量;纯化Legendre颗粒,免疫家兔,获得抗血清,通过中和反应实验测定Legendre以及其它8种噬菌体和Legendre抗血清之间的吸附反应常数K值;采用单斑法测定Legendre的宿主谱;检测Legendre对紫外线、温度、***仿、酒精、酸碱度的耐受性。结果 Legendre的噬菌斑圆形透明,边界清楚,Legendre头部呈多面体立体对称,直径平均为65 nm,尾长平均为215nm;基因组核酸能被双链DNA内切酶EcoRⅠ,Hind Ⅲ及BamH Ⅰ切开,大小约65 kb;Legendre最佳MOI为10-4,最小MOI为10-3,Legendre对耻垢分枝杆菌极度易感;Legendre感染宿主菌的潜伏期为180 min,裂解期为120 min,裂解量为13;Legendre K值为 697,Legendre抗血清对非对应噬菌体的中和活性有差异,对DNAⅢ、Bo4、Clark、Sedge、Leo高,对TM4、D29中和活性较低;Legendre能裂解耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株、多数临床耐药株;Legendre对紫外线、温度、***仿、酒精、酸碱度均敏感。结论 Legendre属于长尾噬菌体科,双链DNA噬菌体,抗原性低,宿主谱广,具有抗耐药结核潜力。
[关键词] Legendre;耻垢分枝杆菌;结核分枝杆菌;生物学特性;耐药结核病
[中图分类号] R52
The Biological Characteristics of Mycobacteriophage Legendre and Its Potentials in Drug-resistant Tuberculosis Control
Liu Ping, Wu Tingting, Peng Li, Guo Shuliang*, Luo Yongai
(Department of Respiratory Medicine, the First Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing, 400016, China)
[Abstract] Objective This paper aimed to research on the biological characteristics of mycobacteriophage Legendre to explore its anti-drug-resistant tuberculosis potentials. Methods The plaques morphological property of Legendre was observed by double-