大肠杆菌阿魏酸酯酶的基因筛选、克隆表达及其酶学性质研究.pdf

分类号 密级


硕 士 学 位 论 文



题 目：大肠杆菌阿魏酸酯酶的基因筛选、克隆表达
及其酶学性质研究

英文并列题目：Studies on gene screening, cloning, expression and
enzymatic characterization of feruloyl esterase
from Escherichia coli BL21

研 究 生： 康乐

专 业： 发酵工程

研 究 方 向： 发酵工学

导 师： 蔡宇杰 教授

指导小组成员： 西北大学 郑晓辉 白亚军

学位授予日期： 二 O 一六年六月二十日


答辩委员会主席： 李崎

江 南 大 学

地址：无锡市蠡湖大道 1800 号

二○一六年六月
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摘 要
摘 要
阿魏酸酯酶（FAEs, EC ）在造纸、食品、医药、纺织、饲料加工、生物合成
及能源开发等领域具有广泛的应用前景而受到世界范围的关注。微生物来源的阿魏酸酯
酶主要集中在青霉和曲霉，细菌如乳酸杆菌也能产生，至今没有大肠杆菌阿魏酸酯酶的
报导。挖掘并研究新酶资源有利于丰富产生菌来源种类，得到特异性强、适应性好的阿
魏酸酯酶。论文对大肠杆菌基因组中可能具有阿魏酸酯酶活性的基因进行了克隆表达；
阿魏酸酯酶活性的验证及其酶学性质的研究。主要研究结果如下：
1) 在含有阿魏酸乙酯底物的平板上对大肠杆菌 BL21 进行了初步鉴定，验证了大肠
杆菌 BL21 具有阿魏酸酯酶活力。
2) 根据BL21全基因组序列分析和蛋白保守结构域分析，从酯酶等水解酶编码基因
中筛选出12个潜在的具有阿魏酸酯酶活性的基因进行克隆表达，这12个基因分别为
menD、mhpC、ybfF、ybhC、yjfP、aes、bioH、yqiA、yeiG、pldB、rutD和yfhR，其基因
大小分别为759 bp、882 bp、765 bp、1284 bp、750 bp、960 bp、771 bp、582 bp、837 bp、
1023 bp、801 bp和882 bp。对粗酶液进行SDS-PAGE验证并检测酶活后得到3个编码阿魏
酸酯酶的基因，分别是mhpC、ybfF和bioH， kDa、
kDa。
3) 纯化 3 个具有阿魏酸酯酶