DNA实验设计方案-玉米基因组DNA的提取与转基因成分分析.doc

《生化实验技术》实验设计方案实验项目: 玉米基因组 DNA 的提取与转基因成分分析专业:生物工程班级: 101 日期: 11月5日一、实验目的: 1 、掌握提取植物组织基因组 DNA 的基本方法。 2 、掌握二苯***法和紫外分光光度法测定 DNA 含量的原理和方法。 3、学会转基因植物转基因成分的分析 4 、学****DNA 的水平式琼脂糖凝胶电泳并学会操作。 5 、掌握高速冷冻离心机、微量移液枪、水平电泳仪等仪器设备的使用。二、实验原理: 核酸是生物有机物体重的重要组成成分,在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起。核酸分为 DNA 和 RNA 两大类, 前者主要存在于细胞核内, 后者主要存在于细胞质及核仁里。在制备核酸时,通过研磨破坏细胞壁和细胞膜,使核蛋白被释放出来。苯酚可使蛋白质变性,蛋白质溶于酚相, DNA 则溶于上层水相。将***仿与苯酚混合使用,可减少酚相中因水的存在而造成 DNA 的少量溶解。 95% 乙醇可使核酸从水相中沉淀出来,用 70% 的乙醇洗涤可以除一些盐分,经 Rnase 降解 RNA ,可得较纯的 DNA 。 DNA 含量与纯度测定, 目前常用紫外吸收法, 利用核酸在 260nm 有吸收峰, 根据公式[ DNA (μg/m L) =A260 * 50* 稀释倍数] 可计算出核酸 DNA 的浓度。由于蛋白质在 280nm 有吸收峰,可根据比值判断 DNA 纯度: A260 / A280 < 时,表明蛋白质含量偏高; < A260 / A280 < 时,表明样品较纯; A260 / A280 > 时,表明 RNA 或 DNA 碎片较多。二苯***法定量测定 DNA 的原理为: 在强酸、加热条件下, 可以使 DNA 中的嘌呤碱基与脱氧核糖间的糖苷键断裂, 产生嘌呤碱基、脱氧核糖与嘧啶核苷酸。其中,2’- 脱氧核糖在酸性环境中成为 w- 羟基-r- ***基戊醛, 此物与二苯***反应生成蓝色化合物,在 595nm 处有最大吸收。 DNA 在 40-400ug 范围内光吸收值与 DNA 含量成正比。在转基因技术中, 外源基因导入到植物体中时, 通常使用花椰菜花叶病毒 CaMV35S 启动子启动下游编码基因的转录。在染色体中, 一个转录单位由启动子序列, 编码序列和终止序列组成,常用终止序列是胭脂碱合酶( NOS )的编码序列的终止序列。这部分序列相对于被导入植物而言, 属于外来基因序列, 所以非转基因植株不含该段核苷酸序列。针对 CaMV35 S 启动子或 NOS 终止子序列进行分析,即可定性分析植株体是否为转基因品种。电泳( electrophoresis )是荷电溶质或粒子在电场作用下发生定向泳动的现象。核酸的分离和鉴定通常采用琼脂糖凝胶电泳。不同大小、不同形状和不同构象的 DNA 分子在相同的电泳条件下( 如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等) ,有不同的迁移率,所以可通过电泳使其分离。琼脂糖凝胶电泳分离后的 DNA 可用溴化乙啶( EB )染色,在 254nm 波长紫外光照射下,呈现橙黄色的荧光。三、实验仪器: 离心机、冰箱、恒温水浴箱、紫外分光光度计、水平电泳槽、电泳仪电源、凝胶成像系统、量筒、移液管、烧杯、玻璃棒、试管、离心管、容量瓶等四、材料与试剂(请写明具体配制方法及使用的量): 1 、材料:玉米片 2 、试剂: