抗体制备技术.ppt

抗体制备技术
1、多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）：用
一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激
机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同
抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的
混合物～。
2、单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAb）：由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体。高度均一、特异性强、效价高、少或无交叉反应性。
抗体制备技术
Ab1
Ab3
Ab4
单克隆抗体
抗原
Ab1
抗血清
Ab1
Ab2
Ab3
Ab4
Ab2
Ab3
Ab4
普通抗血清（多克隆抗体）
脾
B细胞
骨髓瘤小鼠取腹水
骨髓瘤细胞
HAT培养，稀释
单克隆抗体和多克隆抗体产生区别示意图
杂交瘤细胞
+ PEG, 融合
Ab2
抗体制备技术
抗体制备技术
一、多克隆抗体制备
（一）免疫原的制备
（二）免疫动物
（三）免疫血清的纯化
（四）免疫血清的鉴定
（五）免疫血清的
二、单克隆抗体制备
（一）单克隆抗体制备原理
抗体制备技术
抗体制备技术
（二）单克隆抗体制备的技术要点
（三）影响杂交瘤技术的因素
（四）单克隆抗体的应用
三、基因工程抗体技术
（一）人源化抗体
（二）小分子抗体
（三）双特异性抗体
（四）抗体库技术
抗体制备技术
一、多克隆抗体制备
（一）免疫原的制备
免疫原（immunogen）指能刺激机体免疫系
统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原最
重要的性质是免疫原性（immunogenicity）
免疫原—天然抗原、人工或合成抗原；
蛋白质、多糖、脂类、核酸抗原；
具体制备—细胞性抗原、可溶性抗原、半抗
原性抗原和免疫佐剂～
抗体制备技术
1、细胞性抗原制备：
绵羊红细胞（SRBC）- 溶血素；
细菌- 抗菌抗体（动物免疫血清）
2、可溶性抗原制备：
指蛋白质、多糖和脂类等。作为免疫原需要由细胞的破碎、提取与纯化～
1）细胞的破碎（物理法、化学法）
抗体制备技术
2）提取与纯化：
①超速离心分离—是一种根据分离物质的比重特点，通过差速或梯度密度离心，将分子大小不同的抗原颗粒分开的方法，只适宜少数大分子物质的分离。
②选择性沉淀—选择某抗原理化特性，采用相应沉淀剂或溶液环境～例50%饱和硫酸铵盐溶液可沉淀析出学清球蛋；8%～12%PEG
6000可沉淀IgG～。
抗体制备技术
盐析法沉淀抗原的机理
抗体制备技术
③超滤法—利用孔径大小不同的特制薄膜对不同分子大小的抗原物质进行滤筛～
④层析法—包括凝胶过滤、离子交换、亲和层析等，用于抗原等物质的精提～
⑤电泳——（略）
3）鉴定：
鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、
纯度以及免疫学活性。
抗体制备技术
凝胶过滤层析( 分子筛)的作用机理
抗体制备技术