dna实验设计方案玉米基因组dna的提取与转基因成分分析样本.docx

资料内容仅供您学****参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。
《生化实验技术》实验设计方案
实验项目 : 玉米基因组 DNA的提取与转基因成分分析
专业 : 生物工程 班级 : 101 日期 : 11 月 5 日
一、 实验目的 :
1、 掌握提取植物组织基因组 DNA的基本方法。
2、 掌握二苯***法和紫外分光光度法测定 DNA含量的原理和方法。
3、 学会转基因植物转基因成分的分析
4、 学****DNA的水平式琼脂糖凝胶电泳并学会操作。
5 、 掌握高速冷冻离心机、 微量移液枪、 水平电泳仪等仪器设备的使用。
二、 实验原理 :
核酸是生物有机物体重的重要组成成分 , 在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起。核酸分为 DNA和 RNA两大类 , 前者主要存在于细胞核内 , 后者主要存在于细胞质及核仁里。
在制备核酸时 , 经过研磨破坏细胞壁和细胞膜 , 使核蛋白被释放出来。 苯酚可使蛋白质变性 , 蛋白质溶于酚相 , DNA则溶于上层水相。将***仿与苯酚混合使
, 可减少酚相中因水的存在而造成 DNA的少量溶解。 95%乙醇可使核酸从水相中沉淀出来 , 用 70%的乙醇洗涤能够除一些盐分 , 经 Rnase降解 RNA, 可得较纯的 DNA。
DNA含量与纯度测定 , 当前常见紫外吸收法 , 利用核酸在 260nm有吸收峰 , 根据公式 [DNA(μg/mL)=A260*50* 稀释倍数 ] 可计算出核酸 DNA的浓度。由于蛋白质在 280nm有吸收峰 , 可根据比值判断 DNA纯度 : A260／A280＜ 时, 表明蛋白质含量偏高 ; ＜A260／A280＜ 时 , 表明样品较纯 ; A260 ／ A280＞
时 , 表明 RNA或 DNA碎片较多。
二苯***法定量测定 DNA的原理为 : 在强酸、 加热条件下 , 能够使 DNA中的嘌呤碱基与脱氧核糖间的糖苷键断裂 , 产生嘌呤碱基、 脱氧核糖与嘧啶核苷酸。
资料内容仅供您学****参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。
其中 , 2’- 脱氧核糖在酸性环境中成为 w-羟基 -r- ***基戊醛 , 此物与二苯***反应生成蓝色化合物 , 在 595nm处有最大吸收。 DNA在 40-400ug 范围内光吸收值与DNA含量成正比。
在转基因技术中 , 外源基因导入到植物体中时 , 一般使用花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子启动下游编码基因的转录。 在染色体中 , 一个转录单位由启动子序列 , 编码序列和终止序列组成 , 常见终止序列是胭脂碱合酶 ( NOS) 的编码序列的终止序列。这部分序列相对于被导入植物而言 , 属于外来基因序列 , 因此非转基因植株不含该段核苷酸序列。 针对 CaMV35S启动子或 NOS终止子序列进行分
析 , 即可定性分析植株体是否为转基因品种。电泳 ( electrophoresis) 是荷电溶质或粒子在电场作用下发生定向泳动的现象。 核酸的分离和鉴定一般采用琼脂糖凝胶电泳。
不同大小、 不同形状和不同构象的 DNA 分子在相同的电泳条件下 ( 如凝胶浓度