普通生物学试验实验4微生物的紫外诱变.ppt

实验四微生物的紫外诱变一、目的要求掌握紫外线诱发微生物突变的基本原理。掌握选育高产突变型菌株的方法。二、基本原理紫外线是一种最常用的物理诱变因素。它的主要作用是使DNA双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶形成二聚体,阻碍双链的分开、复制和碱基的正常配对,从而引起突变。紫外线照射引起的DNA损伤,可由光复活酶的作用进行修复,使胸腺嘧啶二聚体解开恢复原状。为了避免光复活,用紫外线照射处理时以及处理后的操作应在红光下进行,并将照射处理后的微生物放在暗处培养。三、实验器材菌株枯草芽孢杆菌培养基淀粉培养基溶液或试剂碘液,无菌生理盐水,,玻璃涂布棒,血细胞计数板,显微镜,紫外灯(15W),磁力搅拌器,台式离心机,振荡混合器等。四、操作步骤制备菌悬液取枯草芽孢杆菌48h斜面培养物4-5支→用10ml无菌生理盐水洗下菌苔→倒入无菌大试管→振荡30s,打散菌块→3000r/min离心10min→弃上清液→用无菌生理盐水洗涤菌体2-3次→制成菌悬液→用显微镜直接计数法调整细胞浓度108个/ml。(老师完成)制作淀粉琼脂培养基平板紫外线处理打开紫外灯预热20min。各取3ml菌悬液,分别加入2套6cm无菌平皿中,并放入一根无菌磁力棒。将平皿置于磁力搅拌器上,打开皿盖,在距离30cm,15W的紫外灯下分别搅拌照射1min和3min。盖上皿盖,关闭紫外灯。稀释:把照射过的菌悬液用无菌水稀释成10-1-10-6;涂平板:取10-4、10-5、10-6稀释液和未经照射的稀释液(对照),重复三个平板;培养:用黑布或纸包好,37℃培养24h。观察诱变效应选取cfu数在5-6个左右的处理后涂布的平板观察诱变效应。分别向平板内加碘液数滴,在菌落周围出现透明圈。分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值(HC比值)。选取HC比值大的菌落转接到试管斜面上培养,可用于复筛。五、注意事项紫外线照射计时从开盖起,加盖止;先开磁力搅拌器,再开盖照射,使菌悬液中的细胞接受均等照射;从紫外线照射处理开始,直到涂布完平板的所有操作步骤都需在红光下进行。分别计算紫外线处理1min和3min后的存活率和致死率存活率(%)=致死率(%)=稀释倍数菌落数处理时间/min10-410-510-6各皿菌落数平均值各皿菌落数平均值各皿菌落数平均值0min1min3min计算各皿菌落数,填入表-1。表-2CFU的计算,计算方法参照微生物实验课本207-208页处理时间/min稀释液及各皿菌落平均数两稀释液之比菌落总数cfu/mL备注10-410-510-60min两位以后的数字采取四舍五入的方法填写1min3min