免疫组化基本理论.ppt

.pleteantigen):大多数蛋白质和部分大分子多糖等,分子量MW)(lapten)::用戊二醛等将钥孔血蓝蛋白(Keyholelimpethemocyanin,KLH,牛血清白蛋白Bovineserumalbumin,BSA),卵白蛋白Ovalbumin,OVA或甲状腺球蛋白(Thyroglobulin)等大分子载体,Carrier):种属关系越远免疫原性越大,::分子量>10kDa,MW越大,:抗原具有只与相应抗体发生结合反应的特性,其物质基础是抗原分子表面少于8个氨基酸,糖或核苷酸残基构成的表位(Epitope或称抗原决定簇(,间距越大,免疫原性越大酶解或变性可暴露蛋白内部的抗原决定簇B抗体免疫球蛋白(mmunoglobulin,lg):一对重链(Heavychain和一对轻链Lightchain通过二硫键连接成对称性的“Y”形在氨基端N端),重链的14Antigen-binding和轻链的12组成可变区regionsVariableregion,V区),其氨基酸排列顺序变化很大用于结合不同的抗原决定簇在羧基端(C端),重Lightchain链的34和轻链的12组成稳定区(Constantregion,CHeavychain区),(Antigenbindingfragment,Fab:“Y",(Crystallizablefragment,Fc):“Y"基部由两条不完整的重链组成,可与补体等结合,(Hingeregion)连接Fab和Fc的狭窄区,(Opsonization):免疫细胞对lG结合的抗原反应迅速且激烈,,::分泌物中的主要类型蛋白J结合2-3个gA单体,并与分泌蛋白结合后形成分泌性lgA(:免疫反应中首先出现的类型B细胞CM上单体lgM与抗原的结合,,能激活补体系统,该系统包括肝脏合成的C3等20余种蛋白,能增强免疫反应dlgD:B细胞CM,:其Fc段与肥大细胞CM的Fc受体结合,引起脱颗粒造成过敏反应Allergy)IntestinallumenSecretoryEnterocyte吨小肠上皮吸收细胞OTandB与M细胞合作,形HelperTlymphocyteBlymphocyte成分泌性!A(SgAlymphocytegEreceptorAdenylatecyclaseFusianofgranulesATPMicrofilamentsHeparinproteinkinaseInactivECF-AExocytosisLeukotrieneslgE的Fc段与肥大细胞cM结合,(,免疫动物体时每个抗原决定簇激活一种合成抗体的细胞克隆,产生许多种lgG(针对同一抗原的多种抗体混合物,即多克隆抗体*.多克隆抗体易与类似抗原(即含类似抗原决定簇),(Monoclonalantibody):.用特异性抗原免疫小鼠,分离抗体产生细胞与不产生抗体但能不断增殖的细胞系骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤(Hybridoma)将杂交瘤细胞克隆化,每个杂交瘤细胞只产生一种抗体,对一个抗原决定簇发生反应,:抗原和抗体发生特异性结合,解离系数101M抗原抗体反应的高度特异性,:荧光染料,酶,生物素和胶体金等用于标记抗体,抗原,:即荧光色素,能吸收特定波长的高能量光波而受到激发(Excitation),进而以特定波长荧光)将能量发散mon异硫***酸荧光素(Fluoresceinisothiocyanate