慢病毒的简介.ppt

慢病毒1慢病毒载体概况HIV-,分为灵长类和非灵长类慢病毒。灵长类慢病毒包括HIV-1,HIV-2,猴免疫缺陷病毒(SIV),非灵长类慢病毒包括猫免疫缺陷病毒(FIV),牛免疫缺陷病毒(BIV),马免疫缺陷病毒(EIAV)等,其中HIV研究最为透彻。研究表明慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性,病毒基因组运输至细胞核,从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性是慢病毒成为基因治疗的转移载体。-1的基因结构HIV-1为双链RNA病毒,共有9个基因。gag基因编码病毒的核心蛋白,包括基质蛋白、衣壳蛋白、核衣壳蛋白。pol基因编码病毒复制所需的酶,如反转录酶、整合酶、蛋白酶。env基因编码病毒的包膜糖蛋白,决定病毒感染宿主的靶向性。rev编码的蛋白调节gag、pol、env的表达水平。tat编码的蛋白参与RNA转录的控制。4个辅助基因vif、vpr、vpu、nef编码的蛋白则作为毒力因子参与宿主细胞的识别和感染。两端为长末端重复序列(LTR),内含复制所需的顺式作用元件。-1来源的慢病毒载体以Naldini及Kafri构建的三质粒系统为代表,该系统由包装质粒、包膜质粒及载体质粒3种质粒组成。包装质粒是HIV-1前病毒基因组5’端LTR由巨细胞病毒早期启动子取代,3’LTR由SV40polyA序列取代。包装成分分别构建在两个质粒上,一个表达gag和pol,另一个表达env。载体质粒携带了5’端LTR,和全部5’端非翻译区域,另外还带有rev应答元件(RRE)。包膜表达质粒使用水疱性口炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)用来代替了原病毒的env基因。-1来源的慢病毒载体1997年,Zufferey等将包装质粒上的vif、vpr、vpu和nef基因(即辅助基因)敲除,从而得到的,其他方面与第一代载体系统一致。-1来源的慢病毒载体为减少复制型病毒的产生,可通过减少辅助质粒与载体质粒的同源性,或者将gag/pol和rev编码序列隔离,分散在不同的质粒上。这样的包装系统由四质粒代替原有的三质粒包装系统。质粒一携带了gag/pol编码序列及RRE;质粒二包含了编码rev的序列;质粒三是载体质粒;质粒四表达env。(SIN)慢病毒载体SIN载体的构建是在原病毒载体基础上删除了病毒3’端LTR的U3区增强子和启动子序列的片段。该区域出现突变则在HIV-1载体转录后,其5’LTR会因为缺失HIV-1所需要的启动子和增强子序列而无法复制出完整长度的病毒基因组。,即将包膜质粒,包装质粒和载体质粒共转染人胚肾293T细胞直接产生生产细胞。最后慢病毒分泌到培养基中进行培养而得到大量载体慢病毒。9慢病毒在中枢神经系统中的应用10