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发光免疫分析法资料.ppt


文档分类:医学/心理学 | 页数:约44页 举报非法文档有奖
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发光免疫分析法 Luminescence Immunoassay 一. 概论免疫性是动物在长期进化过程中逐渐发展起来的防御感染和维护机体完整性的十分有效而灵巧的手段。免疫系统的特殊功能是识别“自我”和“非自我”的物质,对自身的物质不起反应,而对外源的及体内改变了的物质则能起专一的免疫反应,排除其对机体的危害。另一方面,免疫系统还担负着维持机体免疫状态的自身稳定性, 以清除体内衰老和突变的细胞。 ( Antigen , Antibody ) 免疫学的重要对象是抗原和抗体的反应问题。抗原是一种外来物质,当其进入动物体内能引起抗体的产生,并能和抗体反应的物质。抗体 ( antibody . Ab ) 与抗原 ( antigen . Ag) 的结合具有极高的专一性和亲合性。不能诱导产生抗体,但能和适当抗体起反应, 即有免疫反应性的简单分子称为半抗原。(1)抗原蛋白质,多糖,核酸,合成多肽,低分子物质(2)抗体抗体是一种蛋白质(主要是γ-球蛋白质) 血清蛋白质在自由电泳场中白蛋白α-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白抗体存在于β -球蛋白和γ -球蛋白内这些蛋白质称为免疫球蛋白 IgM . IgA . IgG . IgD 和 IgE γ M . γ G. γ 2. 放射性免疫分析( RIA ) 1959 Berson 和 Yallow 将免疫反应与分析化学相结合创立了放射性免疫分析法。荷尔蒙的测定先将荷尔蒙注入天竺鼠体内对抗此抗原的抗体( Ab ) Ag * + Ab === Ag *- Ab 要测定一病人的血清标本中荷尔蒙的浓度, Ag + Ag *- Ab === Ag- Ab + Ag * ( + Ag *- Ab ) 测定 Ag *,可计算标本中所含有的荷尔蒙( Ag )浓度 1977 获诺贝尔医学生物学奖分析对象: 测量含量很低的生物活性化合物: 如蛋白质(酶,接受体,抗体) 激素(甾族化合物,甲状腺激素,酞激素) 药物及微生物等。优点:专一性强,灵敏度高缺点: ①放射性同位素可能损害人们的身体健康,以致于实验室要有特殊防护技术②该法还需要用贵重的闪烁计数器和试剂③稳定性-同位素的寿命相对较短 3 酶免疫分析法用酶标记抗原或抗体例:酶联免疫法测定***霉素微量反应板——羊抗兔 IgG 抗体兔抗***霉素抗体+***霉素酶结合物 + ***霉素样品没有结合的酶结合物被洗去,再向相应孔中加入过氧化氢和邻苯二***,作用一定时间后,结合后的酶结合物将无色的邻苯二***转化为蓝色的产物,加入终止液后颜色由蓝变黄,用波长 450 nm (双波长时最适参考波长≥ 600 nm )酶标仪进行检测,吸光值与样品中***霉素含量成反比。酶不稳定、光度分析线性范围窄竞争型酶联免疫法测定***霉素含量示意图 4. 发光免疫分析法荧光免疫分析法化学发光免疫分析法以荧光物质或化学发光反应物质作为标记物。优点: 专一性强灵敏度高稳定性好,可避免放射性污染标记物不同, Fluonescense Immuuoassay (1)一般要求 a 检测最常遇到的样品为血清,它有很高的荧光背景。血清蛋白λ em 325-350 nm ( λ ex 280 nm) 血清中 NADH 和胆红素 430-470 nm ( λ ex 330-360 nm) 探针λ em > 500 nm

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