产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定.doc

产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定摘要:采用琼脂平板扩散实验,从湖南传统发酵腊肉和香肠中筛选出3株对单核增生李斯特菌(Listeriamonocytogene54002)具有明显抑制作用的乳酸菌,排除酸和过氧化氢的干扰后,仍具有抑菌活性,而用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理以后,其抑菌活性消失,因此确定该抑菌物质为蛋白质类物质,即细菌素。三株菌所产细菌素具有一定热稳定性,在pH5~10之间仍具有一定的抑菌活性。通过生理生化实验和16SrRNA基因序列分析对3株菌进行了鉴定。PCR扩增得到1600bp左右的16SrRNA基因序列,将序列通过BLAST软件在NCBI网站上进行同源性对比,。结果显示3株菌的16SrRNA序列和数据库中的屎肠球菌的序列同源性均在99%以上,这与生理生化实验初步鉴定结果一致。关键词:细菌素,筛选,屎肠球菌Identificationandscreengingofbacteriocin-producinglacticacidbacteriaAbstract:ThreelacticacidbacteriumwereisolatedfromHunantraditonalfermentedmeats,,hydrogenperoxides,,~-,thethreebacteriocin-:bacteriocin;screening;usfaecium细菌素是由某些细菌产生的一类抑菌物质,是由细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类多肽类物质[1]。细菌素的抑菌范围一般包括一些亲缘关系相近的细菌,而产生菌对其细菌素具有自身免疫性。目前研究最为深入的细菌素是乳酸链球菌肽(Nisin),又称乳酸链球菌素,是由乳酸链球菌产生的一种多肽,它于1969年得到FAO和WHO的认可,是唯一允许作为防腐剂在食品中使用的细菌素,虽然细菌素已被许多国家允许作为食品添加剂放入食品中,但是也存在很大的缺陷,比如抑菌谱较窄,抑菌活性在碱性条件下不稳定[2]等,寻找高产细菌素以及更稳定的细菌素成为研究的热点。作为细菌素的主要产生菌,乳酸菌生境广泛,数量众多。近年来,国内外学者为获得结构新颖、抑菌活性更为稳定的细菌素,广泛地从当地传统的发酵食品中,尤其是发酵肉制品中进行产细菌素乳酸菌的分离筛选。如deCarvalho从意大利salami香肠中[3]分离到一株能抑制李斯特氏菌的乳酸菌,Noonpakdee[4]从泰国传统发酵香肠nham中分离到一株产Nisin的乳酸乳球菌;Martinis[5]从巴西传统发酵肉制品中共分离得到三株产细菌素乳酸菌,抑菌结果显示,三株菌都具有较强的抑制李斯特氏菌能力;Todorov[6]从葡萄牙传统发酵猪肉制品中分离到两株产细菌素的植物乳杆菌,,,2013菌株发酵原液调pH调pH+(mm)Table1Inhibitoryactivityofthethreeisolatedstrains(mm)我国学者则多从四川腊肉香肠[7]、宣威火腿[8]、泡菜[9-11]、传统乳制品[12-13]等发酵