高分子量小麦谷蛋白亚基 PPT.ppt

实验一小麦高分子量谷蛋白亚基测定●实验内容:测定小麦高分子量谷蛋白亚基●实验目的:①掌握利用不连续十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰***凝胶电泳(SDS-PAGE)分离小麦高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)方法;②了解小麦高分子量谷蛋白亚基的命名方法;③识别部分常见小麦高分子量谷蛋白亚基图谱。小麦高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)与小麦的加工品质密切相关,其组成是小麦品质预测的一项重要指标。HMW-GS作为一种分子标记,有助于提高小麦品质性状遗传改良的效率。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰***凝胶电泳(SDS-PAGE)技术是目前分离小麦HMW-GS的主要方法,此方法具有准确、微量、快速、操作简便、分辨率高等优点,尤其是可以分析半粒无胚籽粒的HMW-GS组成,所剩余的带胚半粒仍可以播种或组织培养,因此此方法已经成为小麦品种鉴定、亲本选配及其后代筛选的重要方法。●实验原理:小麦高分子量谷蛋白亚基不连续SDS-PAGE系统集电荷效应、分子筛效应和浓缩效应为一体,在这三种效应的共同作用下,把小麦谷蛋白亚基按分子量大小分离开来。以亚基组成已知的中国春小麦品种做对照,就可以对待测小麦品种的HMW-GS组成进行鉴定。①电荷效应各种蛋白质按其所带电荷的种类及数量,在电场向一定电极,以一定的速度泳动。迁移率主要取决于所带电荷的多少、分子量的大小以及分子的形状等因素。②分子筛效应由于凝胶具有黏度和较高摩擦阻力,以及其网络结构直接参与了移动颗粒的分离过程,这种区别不同大小分子种类的能力就是凝胶所具有的一种筛分能力即分子筛效应。③浓缩效应蛋白质样品中的各组分在浓缩胶中会被压缩成层,而使原来很稀的样品得到高度浓缩。●实验材料、药品和器材实验材料:小麦籽粒,小麦普通中国春和马奎斯为对照实验器材:离心机、电泳仪、电泳槽、梳子、制胶架、成像仪、研钵、振荡器、微波炉、天平、pH计、移液器、微量进样器、染色盘、摇床、量筒等。实验药品:丙烯酰***、N,N-甲叉双丙烯酰***、N,N,N,,N,-四***乙二***、过硫酸铵、二硫苏糖醇、甘氨酸、甘油、十二烷基硫酸钠、考马斯亮蓝等。试剂配制:①麦谷蛋白提取液:4gSDS+1gDTT+-HCl(PH=)+20ml甘油+30mg溴酚蓝+蒸馏水定溶至100ml。②10×电极缓冲液:Tris-+甘氨酸144g+SDS10g+蒸馏水定溶至1000ml。③30%丙烯酰***:30g+蒸馏水定溶至100ml。④2%甲叉双丙烯酰***:2g+蒸馏水定溶至100ml。8大家有疑问的,可以询问和交流可以互相讨论下,但要小声点9⑤1MTris-HCI(PH=):+蒸馏水定溶至100ml,用1NHCI调PH=。⑥3MTris-HCI(PH=):+蒸馏水定溶至100ml,用1MHCI调PH=。⑦10%SDS:SDS10g+蒸馏水定溶至100ml。⑧10%过硫酸铵:1g过硫酸铵+蒸馏水定溶10ml。⑨染色液:100mgG-250+12g三***乙酸+蒸馏水定溶至200ml。10