生化实验思考题参考问题详解.doc

生化实验讲义思考题参考答案实验一淀粉的提取和水解1、实验材料的选择依据是什么?答:生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。从科研工作的角度选材,还应当注意具体的情况,如植物的季节性、地理位置和生长环境等,动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等,微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。2、材料的破碎方法有哪些?答:(1)机械的方法:包括研磨法、组织捣碎法;(2)物理法:包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等;(3)化学与生物化学方法:包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。实验二总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定?两种滴定方法各有何优缺点?答:我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。间接法的优点是操作简便、反应条件温和,缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差;直接法的优点是反应原理直观易懂,缺点是操作较复杂,条件剧烈,不易控制。实验五粗脂肪的定量测定─索氏提取法(1)本实验制备得到的是粗脂肪,若要制备单一组分的脂类成分,可用什么方法进一步处理?答:硅胶柱层析,高效液相色谱,气相色谱等。(2)本实验样品制备时烘干为什么要避免过热?答:防止脂质被氧化。实验六蛋白质等电点测定1、在分离蛋白质的时候,等电点有何实际应用价值?答:在等电点时,蛋白质分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加,所以处于等电点的蛋白质最容易沉淀。在分离蛋白质的时候,可以根据待分离的蛋白质的等电点,有目的地调节溶液的pH使该蛋白质沉淀下来,从而与其他处于溶液状态的杂质蛋白质分离。实验七氨基酸的分离鉴定-纸层析法1、如何用纸层析对氨基酸进行定性和定量的测定?答:将标准的已知氨基酸与待测的未知氨基酸在同一层析纸上进行纸层析,显色后根据斑点的Rf值,就可以对氨基酸进行初步的定性,因为同一个物质在同一条件下有相同的Rf值;将点样的未知氨基酸溶液和标准氨基酸溶液的体积恒定,根据显色后的氨基酸斑点的面积与点样的氨基酸质量成正比的原理,通过计算斑点的面积可以对氨基酸溶液进行定量测定。3、纸层析、柱层析、薄层层析、高效液相层析各有什么特点?答: 支持介质层析原理层析方向上样量分离效率纸层析滤纸分配上行(多)或下行小低薄层层析玻璃板或塑料板分配、吸附上行较大较高柱层析玻璃柱分配、吸附、离子交换、分子筛、亲和层析等下行可小可大较高高效液相层析不锈钢柱分配、吸附------可小可大高实验八蛋白质含量的测定(1)简述紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理及优点。答:原理:由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收高峰在280nm波长处。在此波长围,蛋白质溶液的光吸收值(OD280)与其含量呈正比关系,可用作定量测定。优点:迅速、简便、不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。实验十影响酶活性的因素(1)本实验中如何通过淀粉液加碘后的颜色的变化来判断酶促反应快慢的?答:在唾液淀粉酶的作用下,淀粉水解,经过一系列被称为糊精的中间产物,最后生成麦芽糖和葡萄糖。变化过程如下:淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦牙糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色。麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。因此反应后颜色如为蓝色说明酶活力低,淡黄色则说明酶活力高。(2)如何通过加入班氏