大鼠FXYD5基因的克隆及重组腺病毒载体的构建【大学临床医学毕业论文设计，精选】.doc

大鼠FXYD5基因的克隆及重组腺病毒载体的构建【大学临床医学毕业论文设计，精选】.doc临床医学论文•大鼠FXYD5基因的克隆及重组腺病毒载体的构建【摘要】 目的:克隆大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因全长cDNA,构建携带FXYD5基因的重组腺病毒载体,为进一步硏究其在自发性高血压大鼠(SHR)中的功能作准备。方法:采用cDNA末端快速扩增的方法获得全长cDNA,并插入到载体pGEM-TEasy中测序分析。将FXYD5基因cDNA克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,随后在BJ5183细菌中与骨架载体AdEasy-1同源重组。筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确后,重组载体磷酸钙・DNA共沉淀法转染AD293细胞,获得携带FXYD5基因的重组腺病毒。结果:大鼠FXYD5基因全长cDNA被成功地克隆;FXYD5重组腺病毒载体被成功地构建。结论:运用细菌内同源重组的方法可以在大肠杆菌中快速高效地构建腺病毒载体;FXYD5重组腺病毒载体的成功构建为探讨FXYD5的生物学功能奠定了基础。【关键词】FXYD5腺病毒基因Abstract:Objective:TocloneratFXYD5genefull-:FXYD5genefull・lengthcDNAwasamplifiedusingrapidamp]ificationofcDNAend(RACE)methodandinsertedintopGEM・TEasyvectorandconfirmedbysequenceanalysis・binatedwithpAdEasy・・Rcsults:Thcful1lengtheDNAofFXYD5wascloned,:・:FXYD5;adenovirus;geneFXYD5属于FXYD家族单跨膜I型膜蛋白。既往硏究发现,FXYD5在某些肿瘤细胞中有大量表达,能下调E■钙粘索和促进肿瘤转移[1]。近来Lubarski等[2]发现,FXYD5多表达在肾脏皮质、十二指肠、脾脏和肺脏,在肾脏主要分布于肾小球集合管基底膜、集合管、集合管的暗细胞,并发现FXYD5和FXYD家族的其他5个成员(FXYD1〜4,FXYD7)一样能调节Nd+・K+・ATPasc活性,FXYD5和Na+-K+-ATPascalphal和bctal亚单位共表达可使钠泵活性增加2倍。FXYD5与Na4-K+-ATPase作用机制目前仍不清楚。而多项硏究均证实Na4-K+-ATPase上确实存在调节血压的位点,并与人和鼠的高血压密切相关[3,4]。本实验室通过基因芯片筛查,发现该基因的表迖水平在自发性高血压大鼠(SHR)组比Wistar