检验医学专业实验IV 临床生物化学检验部分(同名44567).doc

自动生化分析仪实际K值测定实际K值:理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度,特别是ε的影响。ε在波长和温度等不同时有所不同,故有必要获得用户所用分析仪的实际ε,再计算K值,此为~。一、340nm波长实际K值测定【实验原理】:经过有NAD+(NADP+)参与的反应途径,用NADH或NADPH标准液来校正仪器。用己糖激酶(HK)方法测定葡萄糖时,葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。葡萄糖有标准纯品,当反应达到终点时,NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数,计算出实际K值。【注意事项】,当CV>5%时,则重新测定10次。。,需对仪器检修和校正。二、405nm波长实际K值测定【实验原理】:许多酶活性测定时,以人工“色素原”为底物,经酶作用后可释放出在405nm波长具有吸收峰有色的反应产物,如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯***(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。她们在405nm波长时的理论ε分别为18700、9870、9490。可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε,计算出实际K值。以ALP实验(产物为4-NP)为例测定实际K值。【注意事项】-NP标准品纯度要求较高,必要时需纯化。。三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下,测定某标准品的含量,若测得的结果偏低,则需要把测得的结果调整至原标准品的含量,此时调整的数值称为校正因子,则校正K值=理论(实际)K值×校正因子=理论(实际)K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为:L-乳酸+NAD+(LD)→***酸+NADH+H+在反应过程中,乳酸被氧化生成***酸,同时NAD+还原为NADH。因NADH在340nm处有吸收峰,反应会引起340nm吸光度的增高。吸光度增加的速率与样本中LD活性呈正比关系。NADH正向反应的最适pH偏碱性,可使反应平衡偏向产生***酸的方向。【参考范围】***血清LD:109U/L~245U/L【临床意义】:当前临床测定LD活性常见于心肌梗塞、肝病和恶性肿瘤的辅助诊断。:当前没有发现重要的临床意义。,几乎存在各种组织中,如:心、肺、肾、肝、骨骼肌以及恶心肿瘤等疾患时均致此酶增高。【注意事项】,肝素的影响不大,而草酸盐抗凝剂、EDTA都是LD的竞争性抑制剂,能抑制LD活性。。组织提取液若放于-20℃过夜,LD4和LD5会丧失全部的活性。,红细胞、血小板中含有大量的LD。~15min内完成,否则吸光值会降低。【评价】LD能可逆地催化乳酸(lactate,L)和***酸(pyruvate,P)之间的氧化还原反应。~,能使平衡偏向生成***酸的方向。其优点是乳酸和NAD+稳定性好。且NAD+纯品价格较低,过量乳酸对LD活性的抑制较小,反应线性较宽,重复性较好,特异性高。缺点是需要较高的底物浓度,反应速度较慢。