2020年鸡蛋中溶菌酶的提取.doc

鸡蛋中溶菌酶的提取,纯化及纯度鉴定 李莹姝  蒋华云*(南京师范大学生命科学学院,南京210046)摘要:从蛋清中用724弱酸性阳离子交换树脂提取溶菌酶,然后用硫酸铵溶液洗脱,盐析得到溶菌酶。用葡聚糖凝胶层析(SephadexG-75)纯化溶菌酶,收集峰值处样品。用SDS-聚丙烯酰***凝胶(SDS-PAGE)电泳鉴定个步骤留样及所得溶菌酶样品的纯度。();葡聚糖凝胶层析过程纯化样品得到了洗脱峰曲线,但未能收集到峰值处样品;电泳结果显示在纯化过程中溶菌酶纯度不断升高。本实验溶菌酶得率较低,提取工艺有待改进,需进一步减少样品损失;层析过程需进一步熟练掌握,以更好达到纯化效果。关键词:溶菌酶;离子交换树脂,凝胶层析;SDS-PAGE Extraction,purificationandpurityofEgglysozyme YingsLi  HuayJiang*(CollegeofLifeScience,NanjingNormalUniversity,Nanjing210046,China)Abstract: Fromeggwhite,with724weakacidcationexchangeresinextractionoflysozyme,andthenelutedwithammoniumsulfate,(SephadexG-75)purifiedlysozyme,-polyacrylamidegel(SDS-PAGE)();dextrangelchromatographypurifiedsamplesobtainedduringelutionpeakcurve,butfailedtocollectsamplesatthepeak;,lysozymewasthelowrateofextractionprocesscouldbeimproved,theneedtofurtherreducesamplelosses;: lysozyme,Ionexchangeresin,Gelchromatography,SDS-PAGE 溶菌酶(Lysozyme,1,4-β-N-溶菌酶)是一种专门作用于革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的β-1,4-糖苷键的水解酶,因而又称为胞壁质酶或者N-胞壁质聚糖水解酶。溶菌酶在临床上是有效的消炎剂,在食品防腐和基因工程等方面也有广泛的应用。[1][2]溶菌酶来源广泛,人、动物、植物和微生物中均有发现,其中鸡蛋清中含量较高,因此,工业生产溶菌酶常以鸡。蛋清为原料鸡蛋清的溶菌酶是研究得最清楚的一种溶菌酶[3],其化学性质稳定,纯品为白色或微黄色结晶体,易溶于水,不溶于***、乙醇,是一种分子量在14~15kD,等电点pH左右,最适效应温度在50℃,最适pH~的碱性球蛋白。它的生物化学功能是催化某些细菌细胞壁多糖的水解,从而溶解这些细菌的细胞壁。溶菌酶的抗菌及抗病毒活力与pH值有关,在酸性介质中,活力显著增强。当前,溶菌酶的制备有多种方法,最常用的是离子交换树脂吸附法[4]。  溶菌酶的用途很多,由于它本身是一种天然蛋白质,无毒性,能够作为防腐剂、保鲜剂。在医药上,溶菌酶具有多种药理作用,具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效,广泛应用于临床医学。溶菌酶是基因工程、细胞工程、发酵工程中必不可少的工具酶,国外多用于菌体内容物质的提取,在发酵工业上是一种重要的溶菌剂,用于破坏细胞壁,制备无菌提取液。溶菌酶所具有的广泛用途吸引了国内外众多学者对其进行研究,已发表不少关于溶菌酶的试验报道。 1材料和方法  新鲜鸡蛋3颗,购自市场;724型酸性阳离子交换树脂;灭菌纱布;1mol/LNaOH,1mol/LHCl;蒸馏水(实验室桶装水);磷酸缓冲液(pH,);10%(NH4)2SO4溶液;固体(NH4)2SO4 ;BaCl2 ;12﹪分离胶;4﹪浓缩胶;Tris-甘氨酸电极缓冲液;loadingBuffer;标准蛋白Marker;染色液(考马斯亮蓝G-250);脱色液(