T淋巴细胞分离技术的进展.doc

T淋巴细胞分离技术的进展T淋巴细胞分离技术的进展国际检验医学杂志2010年6月第31卷第6期『I11JIl}1Mcxt,june2010,,,孙航审校(重庆医科大学病毒性肝炎研究所400010)?579??综述?【摘要】,,着重描述每种分离方法足否改变了T细胞的生物活性及对后续试验的影响.【关键词】T淋巴细胞;细胞分离;实验室技术和疗法中图分类号::A文章编号:16731l30(2010)060579—03细胞分离技术在免疫学研究巾应用非常广泛,而T淋巴细胞足介导机体特异性免疫J,'T淋巴细胞表型特征及其功能的深入研究,基础理论临床实践中均有重大意义,一直足免疫学研究的热点和}'午有亲和里,各种T淋巴细胞的分离技术均有不同的发展进步,板结合分离法,E花结形成分离法,补体介导的细胞毒分离法,尼龙棉分离法,磁珠分离法和流细胞术分离法等方法,『}fj特异性抗体包被塑料平或培养板,表达特定膜抗原的细胞即与相应抗体结合而被吸附于甲m或培养板表面,悬液中为不表达特定膜抗原的细胞,改变缓冲液的离子强度,将结合在板上的细胞解离,'丸足山Wysocki等报道的,这种方法要求抗体纯度较高,以减少非特异性细胞的结合,且抗体与亲和板有商亲和力,,,将预先与特异性单抗结合的淋巴细胞与之反应后,口f吸附于平皿上,,,经济,并可以同时进行细胞的阳性分选和阴性分选,,该方法适合阴性分选,,且抗原抗体结合后可导致相应细胞被活化,,(AET)处理还足神经氨酸酶处理的绵羊红细胞分离T细胞,都会影响分选Hj米的T细胞的功能活性;同时用AET处理的绵羊红细胞分离T细胞和用尼龙棉分离的T细胞作功能活性上的比较,)4阳性淋巴细胞的方法,,Long等在此基础上建赢了一个概率模型,通过这个模型半定量地判定受体与配体问的亲和大小,,,Clouse等发表了一篇关于}_fj补体介导的绌胞分离法即用Lymphokwik试剂分选T细胞的报道,同时使用尼龙棉分离技术,—kwik分选试剂3种方法分别分选T细胞,结果表明用补体介导的细胞分离法分选细胞更快,更有效,—kwik试剂是一种类似鸡尾押可的混合试剂,含有单克隆抗体和补体,在与将要分选的细胞混合后,能形成密度梯度,,可以很好地进行后续试验,,加双特异性抗体B1S20×3(bispecificantibodyactivatingandretargetingT——cellstoCD20—'positivep,-cells)培养,诱导T细胞的增殖活化,检测细胞因子的变化,来阐述BIS20×,它会激活和杀伤被抗体结合的细胞,因此这种分选方法如今是作为阴选分离法,(concanavalinA,ConA)刺激没有反应,Man