盐酸法舒地尔对大鼠癫痫持续状态海马神经元的保护作用.doc

盐酸法舒地尔对大鼠癫痫持续状态海马神经元的保护作用摘要:目的探讨盐酸法舒地尔对大鼠癫痫持续状态(SE)后凋亡的影响及其可能作用机制。方法将大鼠随机分成3组,对照组(A组)、模型组(B组)和盐酸法舒地尔组(C组),对采用***化锂________________________________________ 匹罗卡品诱发癫痫大鼠模型的海马神经元细胞,采用免疫组化法对TUNEL、XIAP及Caspase ________________________________________ 9阳性细胞进行测定。结果模型组海马神经元细胞TUNEL、XIAP及Caspase ________________________________________ 9较对照组明显增多(P ________________________________________ 9较模型组明显减少(P<),XIAP较模型组显著增加(P ________________________________________ 9表达均明显增加,盐酸法舒地尔能够减轻海马神经元细胞TUNEL、Caspase ________________________________________ 9的表达,促进海马神经元细胞XIAP的表达。盐酸法舒地尔可能通过促进XIAP生成进而抑制Caspase ________________________________________ 9表达,从而起到保护神经元的作用。关键词:盐酸法舒地尔;癫痫持续状态;XIAP;Caspase ________________________________________ 9;凋亡中图分类号::A文章编号:1672 ________________________________________ 1349(2011)09 ________________________________________ 1098 ________________________________________ 02 癫痫持续状态(SE)是指连续癫痫发作持续30min或者在其两次或者多次发作的间歇期意识没有完全恢复的状态。SE有很高的致残率和致死率,探索新的更加有效的SE后神经元保护方法有着重要临床意义。盐酸法舒地尔是一种异喹啉磺***衍生物,主要是通过抑制Rho激酶发挥作用,具有扩张血管、改善脑循环、减轻缺血损伤的作用。本实验旨在观察SE后大鼠脑组织凋亡相关基因XIAP、Caspase ________________________________________ 9的表达情况,探讨盐酸法舒地尔干预对SE导致的神经元损伤的影响及其可能的机制,以期为盐酸法舒地尔应用于临床SE的治疗提供可能的动物实验依据。 1材料与方法 ,体重220g~240g(山西医科大学实验动物中心提供),***化锂(中国医药集团上海制剂公司),匹罗卡品(美国Sigma公司),免疫组化试剂盒、DAB显色剂及多聚赖氨酸、Caspase ________________________________________ 9一抗(BA2216)、XIAP一抗(BA2621,武汉博士德生物有限公司),盐酸法舒地尔(天津红日医药有限公司)。 (A组)、模型组(B组)、盐酸法舒地尔组(C组)。后两组再随机分为4个亚组:分别用于SE后6h、12h、24h和48h时点。采用国内外公认的***化锂________________________________________ 匹罗卡品癫痫持续状态动物模型:按体重127mg/kg,18h后经腹腔注射新鲜配制的匹罗卡品30mg/kg。造模成功后所有大鼠随机分为模型组、盐酸法舒地尔组。盐酸法舒地尔组于达癫痫持续状态1h后采用腹腔注射给药50mg/kg,模型组和对照组1h后腹腔注射等量生理盐水。惊厥评分采用Racine评分法,痫性发作行为分级6级。痫性发作持续超过30min为SE。在SE达1h时,予腹腔注射***10mg/kg,终止痫性发作。 ,用25%乌拉坦4mL/kg深麻醉后,断头取脑,大鼠脑组织置入4%多聚甲醛中固定,常规脱水、透明、浸蜡、包埋后,在视交叉后海马区连续冠状切片,每片厚5μm。HE染色,光镜下观察形态学变化。 (TUNEL法)检测,按试剂盒(POD)提供方法操作,细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞,即凋亡细胞计数5个高倍视野下的凋亡细胞数,凋亡指数(apoptosisindex,AI)以凋亡细胞/1