下载此文档

温度控制对培养流感病毒细胞的影响.doc


文档分类:医学/心理学 | 页数:约4页 举报非法文档有奖
1/4
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/4 下载此文档
文档列表 文档介绍
温度控制对培养流感病毒细胞的影响从机体中取出组织或细胞,模拟机体内的生理条件在体内外进行培养,使之生存和生长,称之为组织培养[1]。因近来发现,用组织培养细胞所分离到的流感病毒,其抗原性和基因特性要比用鸡胚分离到的更接近原始采集的标本,故世界卫生组织号召大家寻找合适的细胞来制备流感病毒疫苗,来代替鸡胚制备疫苗[2]。资料与方法材料:生长成片的MDCK细胞。T-75细胞培养瓶,颈口有倾角。D-MEM培养液:青、链霉素母液(10�000U/ml青霉素G;10�000μg/ml硫酸链霉素),分装后保存于-20℃。HEPES缓冲液,1M母液。胎牛血清,40nm滤过。EDTA-胰酶(0�05%胰酶;0�53mMEDTA4Na),分装后保存于-20℃,牛血清白蛋白组分V,7�5%溶液。1ml、10ml无菌移液管。70%~75%的酒精。待测毒株:红细胞悬液(鸡、豚鼠,由于“O”相毒株不能凝集鸡红细胞,所以在对该类病毒进行鉴定时应使用豚鼠红细胞)。磷酸缓冲液(PBS),0�01M,pH7�4(SigmaP3813)。多道及单道可调加样器单通道可调加样器量程20~200μl、200~1000μl,8通道或12道可调加样器量程20~200μl。孔微量板:鸡红细胞选择“V”型或“U”型底微量板;豚鼠红细胞选择“U”型底微量板。其他耗材,200μl、1000μl滴头、试管、加样槽等。方法:①细胞的传代:这里以T-25细胞瓶单层培养为例,叙述MDCK细胞的培养程序。用于细胞培养的培养基、胰酶等,37℃回温后,用70%~75%酒精擦拭后放于生物安全柜内[3]。弃培养液,加1ml预先37℃温浴的EDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层,37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料表面分离(5~10分钟)。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。加10ml完全型D-MEM,轻轻上下移动移液管来分散细胞团。一般情况下,1瓶细胞传3瓶,每2~3天需传1代。②MDCK细胞保存及复苏:MDCK细胞对流感病毒的敏感性随其代数增加而下降,故各实验室应液氮冻存代数较低的细胞作为种子。一般保存液为含10%二***亚砜和90%小牛血清。首先进行细胞消化,消化过程同细胞培养的消化。细胞消化后,加入配置好的细胞冻存液,混匀后分装到细胞冻存管内。细胞冻存浓度1×106。MDCK细胞保存:将单层细胞消化分散成为单细胞,加入0�9ml小牛血清和0�1ml二***亚砜混合保存液,每瓶加1ml保存液,缓慢冻存:先放4℃2小时,转放-70℃4小时,再转放液氮中长期保存。MDCK细胞复苏:将细胞生长液放入37℃回温,回温后以70%~75%的酒精擦拭,放入生物安全柜(无菌的操作台)内,自-70℃或液氮中取出细胞冻存管,检查盖子是否旋紧,由于热胀冷缩过程盖子容易松掉,立即放入37℃水浴中快速解冻,轻轻摇动使其在1分钟内全部融化,以70%~75%的酒精擦拭保存管外部,移入生物安全柜(无菌操作台),取出1�0ml解冻的细胞悬液,缓慢加入有生长液的细胞培养瓶内,混合均匀,放入培养箱培养,次日更换细胞生长液。③红细胞凝集试验:根据所用的红细胞种类选用适当的微量板。将微量板横向放置:垂直方向称列,如孔A1~H1称为第1列;平行方向称行,如A1~A12称为A行。标记好待检病毒的实验室编号及加样顺序。多道加样器装好200μl带滤芯滴头,于加样槽中吸取50μlP

温度控制对培养流感病毒细胞的影响 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

非法内容举报中心
文档信息
  • 页数4
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人aady_ing01
  • 文件大小53 KB
  • 时间2019-12-06