福州地区儿童急性呼吸道人类偏肺病毒感染_5671.doc

福州地区儿童急性呼吸道人类偏肺病毒感染
【摘要】  目的探讨人类偏肺病毒(HMPV)在福州市冬春季儿童急性呼吸道感染(ARTI)中的流行情况及其临床意义。方法86例年龄8个月~14岁ARTI患儿的咽拭子,用巢式逆转录聚合酶反应(RTPCR)的方法检测脱落细胞的HMPV的M基因、呼吸道合胞病毒(RSV)的N基因。结果HMPV阳性19例(%),RSV阳性11例(%);其中3例HMPV与RSV均阳性。DNA测序显示,3份HMPV PCR产物核苷酸序列相同,与GenBank中的HMPV M基因片段核苷酸序列同源性88%~98%。结论HMPV是引起福州市儿童ARTI的常见病原之一。HMPV可与RSV合并引起ARTI。
【关键词】  人类偏肺病毒呼吸道合胞病毒呼吸道感染急性病序列分析 DNA 福州
   呼吸道病毒是引起小儿急性呼吸道感染(acute respiratory tract infections,ARTI)的常见病原。传统的呼吸道病毒有呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、副流感病毒、腺病毒、鼻病毒等,约1/3患者的感染病原不明。2001年,荷兰科学家发现一种新的可引起人类呼吸道感染的副黏病毒人类偏肺病毒(human metapneumovirus,HMPV)[1]。目前HMPV已被认为是导致婴幼儿以及***ARTI的重要病原。HMPV存在的两种基因型(A型与B型)均能导致ARTI[24]。为探讨HMPV与福州市儿童ARTI的关系,笔者对福州市ARTI患儿进行了HMPV的检测。
    1对象和方法
    ~2006年4月因ARTI就诊的患儿,选择发病<2 d、未使用过任何抗病毒药物者86例:男性50例,女性36例,男∶女=
∶1,年龄(±)岁(8个月~14岁)。所有患儿符合ARTI的临床诊断标准[5]。
    (MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit )、Ex Taq DNA聚合酶为日本TaKaRa公司产品。A3500逆转录试剂盒为美国Promega公司产品。HMPV M基因引物由香港中文大学Paul KS Chan教授惠赠。RSV N基因引物参考文献[6]设计,大连宝生物工程公司合成,引物序列见表1。表1HMPV与RSV RTPCR引物的寡核苷酸序列 HMPV:人类偏肺病毒;RSV:呼吸道合胞病毒;RTPCR:逆转录聚合酶链反应;W:T或A.
    , mL无菌生理盐水的EP管中洗涤。按照病毒核酸提取试剂盒及逆转录试剂盒说明书操作。
    (PCR)(1)巢式PCR扩增HMPV M基因。PCR反应体系50 μL含dNTP mmol/L,Mg2+ mmol/L,DNA模板200 ng, Ex Taq U。用Hema 240 基因扩增仪(珠海黑马医学仪器公司)进行PCR反应。第1次PCR:引物P1,P2各1 μmol/L;反应条件:95 ℃ 5 min→95 ℃ 30s→52 ℃ 40 s→72 ℃ 40 s,扩增40 个循环;72 ℃