免疫原和抗血清的制备.ppt

动物免疫和多克隆抗体的制备
多克隆抗体的产生示意图
多克隆抗体(polyclonal antibody,pcAb):天然抗原刺激多种B淋巴细胞克隆产生的多种抗体的混合物
多克隆抗体的制备
将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物,该动物在含有多种抗原表位的抗原刺激下,体内多个B细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种不同表位的抗体,其混合物为多克隆抗体
抗原来源与动物种属的关系
种属差异越远,免疫原性越强
动物个体的选择
适龄、健康、体重符合要求
抗原的性质
一、免疫动物的选择
多克隆抗体制备的步骤
抗原制备
免疫动物
采血
收集血清
免疫方法
常用注射方法
皮下注射
注射到皮下组织内
皮内注射
注入表皮与真皮之间
足底注射
肌肉注射
静脉注射
腹腔注射
单克隆抗体
单克隆抗体是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞(浆细胞)产生的针对单一抗原决定簇的抗体
这种抗体的重链、轻链及其V区独特型的特异型性、亲和力、生物学性状及分子结构均完全相同
性质
常规血清抗体
单克隆抗体
无关的Ig
多
少或几乎无
其它血清蛋白
有
少,培养物上清常有10%胎牛血清
Ag-Ab结合
免疫原的全部成分的全部抗原决定簇
免疫原中的一种成分的一个抗原决定簇
特异性亲和力的重复性
不同批号间有变化
无变化
与其它抗原的交叉反应
与带有共同抗原决定簇的抗原有部分交叉
一般无。结合到共同决定簇则是完全的
免疫球蛋白的种类与亚类
完全是混合的
只是一种或几种
单抗与多抗
免疫原的剂量
中间剂量范围内,免疫原剂量增加可获得高效价抗体
免疫间隔时间
第一次和第二次间隔两周左右,二次免疫后2周左右采血,检测抗体水平
免疫途径
皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结
二、免疫程序
抗体的鉴定和保存