一种pcr引物设计方法.docx

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、%的双氧水),膜条避光显色30分钟后,换成纯水。膜条的照片上显示杂交阳性对照点、探针点显现很亮的蓝色斑点,阴性对照位点、和空白点没有信号(见图I)。实施例I的结果表明,PriSpacerata技术是可行的,可省略PCR产物热变性的步骤,而且PriSpacerata技术设计的引物杂交的点的亮度比常规方法设计的引物杂交的更·売。实施例2、用C3Spacer、dSpacer插入设计引物DNA杂交中无需热变性PCR产物的检测Novagen(Merck)改造的重组T7卩遼菌体。实施所用的步骤、方法和材料与实施例I中完全一样,但有两点不同。不同点I:在反向引物和末端序列之间加入了C3Spacer和dSpacer两个“垫片碱基”组成的垫片序列;不同点2:膜条点样增加了两个点。这样,这两条引物就设计成BiotinT7Select2F:5’-Biotin-AGTC-3,;SpacerT7Select2R:5,-GTCGTGACTGGGAAAAC-C3Spacer-dSpacer-AAGGGGTTAACTAGTTACTC-3’。用BiotinT7Select2F-SpacerT7Select2R引物组合PCR扩增改造重组的T7基因组DNA,可以扩增出一条135个碱基对的产物,这条产物包含116个碱基对的双链碱基序列、17个单链脱氧核糖核苷酸碱基、和两个单链的“垫片碱基”,PCR反应体积为10ul。整个PCR产物碱基序列如下5'-Biotin-AGTCAGGTGTGATGCTCGGGGAIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII3'-GGCGTGAGCTCATTGATCAATTGGGGTT-3'IAA-C3spacer-dspacer-CAAAAGGGTCAGTGCTG-5'