下载此文档

猪圆环病毒2型Cap蛋白亚单位表达工艺的中期报告.docx


文档分类:医学/心理学 | 页数:约2页 举报非法文档有奖
1/2
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/2 下载此文档
文档列表 文档介绍
该【猪圆环病毒2型Cap蛋白亚单位表达工艺的中期报告 】是由【niuwk】上传分享,文档一共【2】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【猪圆环病毒2型Cap蛋白亚单位表达工艺的中期报告 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。猪圆环病毒2型Cap蛋白亚单位表达工艺的中期报告猪圆环病毒2型Cap蛋白亚单位表达工艺的中期报告猪圆环病毒2型(porcinecircovirustype2,PCV2)是一种单链DNA病毒,是引起猪早期淋巴细胞减少综合征(porcinecircovirus-associateddisease,PCVAD)的主要病原体之一。Cap蛋白是PCV2的外壳蛋白,是PCV2病毒颗粒的主要成分之一。Cap蛋白含有9个亚单位,其中亚单位4和亚单位5的结构域相同,称为V1/V2,亚单位6和亚单位9的结构域相同,称为V4/V5。Cap蛋白是PCV2病毒颗粒的主要抗原表位,也是PCV2感染后产生的主要抗体的靶点。因此,Cap蛋白的制备是PCV2疫苗研究的重要环节之一。近年来,研究人员通过基因重组技术,将PCV2的Cap蛋白亚单位克隆到表达载体中,在大肠杆菌等细胞中表达和纯化。然而,由于Cap蛋白亚单位的复杂结构和多个亚单位的组装,其表达和纯化过程中存在许多技术难点,如蛋白质稳定性差、表达量低、纯化难度大等问题。因此,研究高效表达和纯化Cap蛋白亚单位的工艺具有重要意义。本实验采用基因重组技术,将PCV2的亚单位4、5、6、9的编码序列克隆到pET28a(+)载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。经过优化表达条件和纯化工艺,获得了表达量较高的亚单位V4/V5和V1/V2。通过Westernblot和SDS-PAGE分析,证明表达的蛋白具有很好的特异性和纯度。现将具体实验过程和结果如下进行介绍:(+)载体中,构建出pET28a-V1/V2和pET28a-V4/V5两个表达载体。测序验证后,将两个载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。、诱导剂浓度、诱导时间等表达条件的优化,得到了较高的表达量。最优条件为:1mMIPTG诱导2小时,温度为30℃。(DE3)含有表达载体的细胞培养后,离心收集菌体。将集落重新悬浮在裂解缓冲液中并进行超声裂解。离心去除细胞碎片后,通过融合标签纯化,将V1/V2和V4/V5亚单位纯化至较高纯度。-PAGE分析表达和纯化的Cap蛋白亚单位V1/V2和V4/V5的特异性和纯度。结果表明,表达的蛋白具有很好的特异性和纯度。综上所述,本实验成功表达和纯化了PCV2的Cap蛋白亚单位V1/V2和V4/V5,并且取得了较好的表达和纯化效果。下一步工作将进一步对蛋白质进行结构和功能的研究,为PCV2疫苗的研制提供新的理论支持。

猪圆环病毒2型Cap蛋白亚单位表达工艺的中期报告 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

相关文档 更多>>
非法内容举报中心
文档信息
  • 页数2
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人niuwk
  • 文件大小10 KB
  • 时间2024-04-18