下载此文档

魔芋葡甘聚糖对人结肠细胞株基因组稳定性的影响.pdf


文档分类:论文 | 页数:约8页 举报非法文档有奖
1/8
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/8 下载此文档
文档列表 文档介绍
该【魔芋葡甘聚糖对人结肠细胞株基因组稳定性的影响 】是由【小泥巴】上传分享,文档一共【8】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【魔芋葡甘聚糖对人结肠细胞株基因组稳定性的影响 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。:..魔芋葡甘聚糖对人结肠细胞株基因组稳定性的影响李翔1-一,曹宇1,一,唐湘华1,一,汪旭1,2,3,倪娟q,2(,云南昆明650500;,云南昆明650500;,浙江台州318000)摘要:为探究魔芋葡甘聚糖(konjacgluconnan,KGM)对结肠上皮细胞基因组稳定性的影响,以正常结肠细胞株NCM460和结肠癌细胞株SW620、HCTll6为研究材料,用质量浓度为0、、、、5、10、20、40mg/mL的KGM处理受试细胞24、48、72h,以四氮唑蓝(Mrr)法检测细胞活力:并以CBMN—Cyt实验检测质量浓度分别为5、20、30mg/mL的KGM处理72h后受试细胞的基因组不稳定性(genomeinstability,GIN)、核分裂指数(nucleardivisionindex,NDI)及凋亡水平。结果显示,不同质量浓度KGM作用72h后,在5~40mg/mL时NC:M460细胞活力显著上升(19<),其GIN在KGM质量浓度为5mg/mL时极显著降低(19<),而30mg/mL时则极显著升高(P<):5~40mg/mL的KGM显著抑制HCTll6细胞的活力(P<),在40mg/mL时SW620细胞活力极显著被抑制(P<),且在KGM质量浓度为5~30mg/mL时,SW620和HCTll6这2株细胞的GIN和细胞凋亡率均显著增加(P<),NDI显著降低(P<)。结果表明,低质量浓度(5mg/mL)的KGM有利于维护正常结肠上皮细胞NCM460的基因组稳定性。各质量浓度(5~30mg/mL)的KGM都会增加结肠癌细胞SW620和HCTll6GIN和凋亡发生率。这可能是其维护肠道健康的分子基础。关键词:魔芋葡甘聚糖:基因组不稳定性;肠道健康中图分类号::1673—1689(2023)11-0011—08DOl:…,CA0Yul…,TANGXianghual…,WANGXul‘’NIJuan+1·2(,YunnanNormalUniversity,Kunming650500,China;,MinistryofEducation,YunnanNormalUniversity,Kunming650500,China;,Taizhou318000,China)Abstract:annan(KGM)ongenomicstabilityincolonicepithelialcells,,,,,5,10,20,and40mg/mLfor24,48,—tetrazoliumbromide(MTT)—Cytassaywas收稿日期:2021—09—29修回日期:202l一10一28基金项目:同家自然科学基金项目(315603072,31860301)。。通信作者:倪娟(1982一),女,博士,剐教授,硕士研究生导师,主要从事营养基因组学研究。E—mail:gt—******@-’3【宣扬拔枣学报2023年第42卷第11期万方数据:..LIXiang,etal:enomeStabilityofHumanColonCellLinesperformedtodetectthegenomeinstability(GIN),nucleardivisionindex(NDI),andapoptosislevelsinthetestedcellsaftertreatmentwithdifferentconcentrationsofKGM(5。20,and30mg/mL)(P<)within5-40mg/mL,whiletheirGINsignificantlydecreased(P<)at5mg/mLKGMandsignificantlyincreasedat30mg/mL(P<).TheviabilityofHCT116cellswassignificantlyinhibitedbyKGMatconcentrationsof5-40mg/mLfP<),whileKGMataconcentrationof40mg/mLexhibitedanextremelypronouncedinhibitoryeffectontheviabilityofSW620cells(P<).Moreover,GINandapoptosisrateofSW620andHCTllcellssignificantlyincreasedatKGMconcentrationsof5-30mg/).whileNDIreducedsignificantly(P<).Theresultssuggestthatlowconcentration(5mg/mL)(5-30mg/mL):annan(KGM),genomicstability,intestinehealth魔芋(konjac)是多年生天南星科草本植物的地凋亡、十扰能量代谢、调控信号通路等生物学过程下块茎。魔芋葡甘聚糖(koniacgluconnan,KGM)是抑制或延缓癌细胞的增殖过程。例如,蒲公英多糖魔芋块茎中的水溶性膳食纤维,,具有水溶性、成膜性、持水表达,从而诱导乳腺癌细胞凋亡,发挥其抗乳腺癌性、胶黏性、增稠性、衍生性、配伍性等多重优良特作用旧;绿茶中的茶多糖可以降低结肠癌细胞周期性和特殊的生物活性㈣]。KGM具有降低胆固醇、预蛋白cyclinD1的表达[13],阻止肿瘤细胞由G1期进防高血压、高血脂、糖尿病等多种生理功效阳]。人S期,使癌细胞的分裂及增殖受到十扰:Wu等人肠道是人体最大的消化和排泄器官[61,肠黏膜用裙带菜多糖处理乳腺癌MCF一7细胞,观察到裙上皮细胞通过相互连接,形成了一个完整的生物屏带菜多糖可以阻滞细胞S期M。已有研究表明,KGM障(肠上皮细胞屏障),[7]。基因组稳定性是维护细胞生理稳态的重要胃黏膜,清洁胃壁,还具有良好的肠道益生性[15。1q。基础,基因组稳定性下降是众多癌细胞的特征之一[8]。流行病学实验表明,KGM对预防结肠癌具有一定的少量的基因组不稳定性()可积极效应[j7~9/,其可能通过影响细胞因子如IL一1口、诱发细胞周期停滞,细胞将启动相应机制修复受损TNF一“和IFN—y等的表达发挥抗肿瘤作用。作者研基因组;若细胞出现过高且不可逆的GIN时,,通过各种死亡途径被清除[9]。在及对不同类型细胞的生长状况产生差异的影响。消化道中,,进而使肠道屏障功能发生异常,引发生啊露黔婆化级联反应,、肠易激综合征,以及一部分肠外慢性人正常结肠上皮细胞NCM460、人结肠癌细胞炎症的发生。若机体长期处于炎症微环境中,DNASW620、HCTll6细胞:中国科学院细胞库:二***将会受到持续的氧化胁迫及炎症因子的干扰,再次亚砜:Biosharp公司;细胞松弛素B(cytochalasinb,增加其损伤概率,导致GIN的发生频率显著增加,CB)、磷酸缓冲盐溶液(PBS)、青/链霉素溶液、L一谷细胞程序性死亡过程终止,增大细胞恶性转化及形氨酰***、新生牛血清、RPMI一1640培养基:Gibco公成肿瘤细胞的可能∽I、司;四***偶氮唑盐(MTT):美国Sigma公司:台盼许多研究表明,植物多糖能够有效地抑制癌症兰染液:Solarbio公司;吉姆萨粉末:上海三思尔公的发生发展…],植物多糖可通过调控细胞周期、诱导司;KGM:由作者所在生物能源持续开发利用教育万方数据:..部工程研究中心提供。加入四***噻唑蓝(tetramethvlthiaz01eblue,MTT)20L2主要仪器与设备“L继续培养4h后终止培养。吸弃每孔液体,加人超净T作台SW—CJ一2FD型:苏州安泰空气技150txLDMSO后置摇床上缓慢摇匀10min。待结晶术有限公司;二氧化碳培养箱MCO一15AC型:日本物充分溶解后,用酶标仪在49011H1波长处测定吸i洋;细胞涂布离心机TXD3型:湖南湘仪离心机仪光度,绘制生长曲线[20l。器有限公司;光学显微镜VANOX—S型:日本/_--Q旦塞垃塑×100%Olympus;酶标仪SpectraMaxiD3型:美谷仪器有限0D枷。∥、公司;立式压力蒸汽灭菌锅LDZX一50KBS型:上海式巾:,为细胞存活率,%;OD实验组为实验组在申安医疗器械厂。49011H1处吸光度;OD对照纠为对照组在490llnl处的L3-±$/N培养吸光度。NCM460、(CBMN—于含有体积分数10%新生牛血清、体积分数1%谷Cyt)氨酰***(L~glutamine,L—Glu)、%青霉素/将NCM460、SW620及HCTll6分别以3x105链霉素溶液的RPMI一1640完全培养基中,并置于个/mL接种到细胞培养6孑L板巾,于37℃、体积分培养箱内静置培养,培养箱内CO:体积分数为5%,数5%的CO:条件下培养,待细胞贴壁后,加入温度为37℃,每2~3d更换一次培养基,待细胞铺KGM(0、5、20、30mg/mL),72h后弃含KGM的培养满75%~90%瓶底面积时进行细胞计数并传代。基,用含有CB(终质量浓度为3Ixg/mL),24~28h后收集细胞。经涂片、固定、染色、,分别按计数标准统计单核、双核细胞中的mL蒸馏水中,配置成240mg/mL的储备液。微核、多核、核质桥、核芽、凋亡等指标,、SW620及HCTll6量浓度KGM处理后3种受试细胞的GIN、核分裂细胞以每孔4x105个/mL接种至细胞培养96孔板指数(nucleardivisionindex,NDI)和凋亡率,见图1。巾,于37oC、体积分数5%的CO:条件下培养,,每孑L加入预设质量浓度(0、、、、5、10、20、40mg/mL)的KGM分别处理24、48、one—wayANOVA进行组件比较,所有数据均用平72h。均数-i-标准误表示;。(a)单核细胞(d)含有核质桥的双核细胞(e)含有核芽的双核细胞(f)凋产细胞图1CBMN--Cytexperiment苫靠5≤抬投枣学报2023年第42卷第11期万方数据:..LIXiang,etal:enomeStabilityofHumanColonCelLinesHCTll6细胞在10~40mg/mL处理后细胞的活力显2结果与分析著提高(P<)。,2株癌细胞SWll6和SW620的细胞活力经不同质量浓度KGM处理NCM460、SW620、显著被抑制。当处理72h后,在KGM质量浓度达HCTll6细胞24、48、72h后,MrrI’法检测细胞活40mg/,结果见冈2~4。5~40mg/mL的KGM处理24、%%,表明KGM可抑制结48、72h,显著提高了NCM460细胞的活力(P<肠癌细胞增殖,见图3~4。根据细胞活力数据显示,),见图2。经5—40mg/mLKGM处理24h后,将后续实验的最高质量浓度设置为HCTl16半致死SW620和HCTll6细胞活力显著提高(P<);处质量浓度的80%,最1130mg/mL,处理时间为72h。(P>),11美门蜒1掣焉鋈R蚝罂景1魔芋葡甘聚糖质量浓度/(mg/lnL)魔芋葡甘聚糖质量浓度/(mg/mL)(a)作用24h后细胞生长曲线(a)作用24h后细胞生长曲线1l享享R基1嫂1霉萎|·导1魔芋葡甘聚糖质量浓度/(mg/mL)魔芋葡甘聚糖质量浓度/(mg/mL)(b)作用48h后细胞牛长曲线(b)作用48h后细胞生长曲线1摹更l杂1R甚蝗詈1qN、詈1qN、掣焉1魔芋葡甘聚糖质量浓度/(mg/mL)魔芋葡H‘聚糖质量浓度/(mg/mL)【C)作用72h后细胞生长曲线(c)作用72h后细胞牛长曲线数据均为3组重复观测值的平均值±标准误,与对照组相比数据均为3组重复观测值的平均值±标准误,与对照组(0mg/mL),。P<,“P<,…P<。相比(0mg/mL),+P<,“P<,…P<。图2不同质量浓度KGM处理24、48、72h对NCM460细图3不同质量浓度KGM处理24、48、,48andtheviabilityofSW620cellstreatedfor24,4872hand72hV0l42Issue112023万方数据:..低质量浓度(5~20mg/mL)的KGM则降低了GIN水平和细胞凋亡率,对正常肠道细胞的健康表现出维护效应:但高质量浓度(30mg/mL)的KGM处理NCM460细胞72h后其GIN显著升高,提示高质量浓度KGM会诱发正常结肠细胞基因组不稳定性,摹\R蟪霉导见图5(b)。这与郭伟等『21]的动物模型研究结果一致,即高质量浓度KGM不利于肠道健康;不同质量浓度KGM对细胞的NDI发生频率无显著影响,见魔芋葡L|‘聚糖质量浓度/(mg/mL)图5(C):随着KGM质量浓度的升高,细胞凋亡率逐(a)作用24h后细胞生长曲线渐降低,见图5(d)。30mg/mL的KGM极显著降低NCM460的凋f率(P<)。、N…以及琴1R细胞凋亡发生频率的影响KGM处理72h后,质蝗翟量浓度为5~30mg/mL时极显著增加了SW620细导l胞微核、核芽的发生频率(P<),核质桥发生频率无显著变化,见图6(a);KGM质量浓度为5~30mg/mL时,GIN发生频率显著增加(P<)。魔芋葡甘聚糖质量浓度/(mg/mL)(b)作用48h后细胞生长曲线KGM在20~30mg/mL时,GIN发生频率增加极显著(P<),见图6(b);NDI发生频率随KGM质量浓度的增加呈极显著降低趋势,P<:KGM在20~30mg/mL时细胞凋亡发生率极显著增加(图6享1R(d),P<)。熄粤2。(:M对IICTll6(jIN、NDI以目及细胞凋亡发生频率的影响处理72h后,质量浓度为51319/mL的KGM极显著增加了HCTll6细胞微核发生频率(P<),质量浓度20mg/mL的KGM魔芋葡甘聚糖质量浓度/(mg/mL)显著增加其微核发生频率(P<),见图7(a);(C)作用72h后细胞生长曲线KGM质量浓度在20mg/mL时核质桥发生频率极显数据均为3组重复观测值的平均值±标准误,与对照组相比著增加(P<),KGM质量浓度在5、30mg/mL时(0mg/mL),+P‘<,”P<,…P<。核芽发生频率极显著增加(P<);KGM质量浓度图4不同质量浓度KCM处理24、48、72h对HCTll6细胞活力的影响在5~30mg/mL时GIN发生频率极显著增加(P<),见图7(b);KGM质量浓度在5mg/mL和30viabilityofHCTll6cellstreatedfor24,48andmg/mL时NDI发生频率显著降低(P<),见图772h(c):在KGM质量浓度为5~30mg/(P<),见图7(d)。、NDI以及细胞凋亡发生频率的影响CBMN—Cyt实验结果目前,已有研究证明KGM对肠道健康有益,,5~20mg/mL作为一种优质的益生元,可促进肠道中双歧杆菌、的KGM可极显著降低其微核发生频率(P<),乳酸杆菌等有益菌的生长[22-23],可使受损的黏膜屏KGM为20~30mg/mL时核质桥发生频率显著上升障功能恢复,起到调节肠道微生物群稳态、抑制病(P<),核芽发生频率无显著变化,见图5(a);巾原菌大量繁殖、增强肠道免疫的作用,对肠道疾病i磊5《抬拔枣学报2023年第42卷第11期万方数据:..LIXiang-etal:annanonGenomeStabilityofHumanColonCellLines—————————————————————————————————————————————————————————————————————————一6摹旃4葵刊警25≮㈦心O◆一015O08摹更006旃o10斟§§o·◆K(:M质量浓度/(mg/mL)KGM质量浓度/(Ⅱ19/mLl(C)/f:同质量浓度KGM作用72h(d)不同质量浓度KGM作用72hYyX,fNCM460NDI的影响NC/、_1460细胞凋亡率数据均为3组重复观测值的平均值±标准误,与对照组比较(0mg/mL),,+,4+、NDI和GIN的影响Fig·5EffectsofdifferentconcentrationsofKGMonapoptosis,NDI,andGINofNCM460celltreatedfor72h4836装碍24虽1求\浔爨刊越zHo20O◆微核核质桥核芽(a)不同质量浓度KGM作用72hX十SW620微核、核质桥、◆052030K(;M质量浓度/fnl∥mL)KCM质量浓度他“g/mL)(C)4j同质量浓度KGM作N72hX,j-(d)不同质量浓度KGM作J手172h后SW620NDI的影响SW620细胞凋亡率数据均为3组重复观测值的平均值±标准误,与对照组比较(0…g/mI.),8P<,”P<.…P<、NDI和GIN的影响Fig·6EffectsofdifferentconcentrationsofKGMonapoptosis,NDI,andGINofSW620ceIItreatedfor72h圜Vol42Issue112023万方数据:..李翔,等:(a)不同质量浓度KGM作用72hX}HCTll6一KGM质量浓度/(mg/mL)微核、核质桥、核芽的影响(b)不同质量浓度KGM作用72h对HCTI16GIN的影响O15O%长O10瓣O舛臻划O05划0£|U曝O~0~052030052030KGM质量浓度/(mghnL)KGM质量浓度I(mglmL)(C)不同质量浓度KGM作用72h对(d)不同质量浓度KGM作用72h后HCTl16NDI的影响HC'11116细胞{|苛亡率数据均为3组重夏观测值的平均值±标准误,与对照组比较(0mg/mL),+P<,”P<,…P<。图7不同质量浓度KGM处理72h对HCTll6细胞凋亡、,NDIandGINofHCTll6celltreatedfor72h的缓解起到积极作用[24-25J。本研究显示,存正常结肠KGM在正常细胞和癌细胞中表现出不同的效应,即上皮细胞NCM460中,中低质量浓度(5~20mg/mL)在正常细胞中可维护基凶组稳定性,而存癌细胞中的KGM降低了GIN水平和细胞凋产率,对正常肠则诱发基因组不稳定性,这可能是其维护肠道健康道细胞的健康表现出维护效应。但高质量浓度(30的分子基础。结果显示,高质量浓度(30m咖L)的mg/mL)的KGM处理NCM460细胞72h后使其KGM处理NCM460细胞72h后可使其GIN显著升GIN最著升高,这与黄夏伶等研究结果一致瞄1。在高高,细胞凋亡率显著降低,。其原凶可能是细胞聚集以及小肠完整结构破坏,即高剂量的KGM细胞凋亡率与KGM质量浓度之间存在时问上的滞造成肠道细胞生成劣势,这可能是大多数肠道动力后,后期将适量增加KGM的质量浓度再次验证。本不足的老年人过量食用葡甘聚糖后排便困难的重研究仅在离体条件下从基因组稳定性水平考查了要原因之一。质量浓度为5~30mg/mL的KGM能够KGM对不同病理状态的肠上皮细胞的影响,对于其昆著诱发SW620和HCTll6细胞高水平GIN,并降作用机理还有待从活体及分子水平更进一步深人低2株结肠癌细胞的NDI,使细胞凋亡率显著升高。研究。参考文献:『1][J].粮食与食品工业,2019,26(5):50—[J].Cereal&FoodIndustry,2019,26(5):50—52.(inChinese)『2]AL—GHAZZEWIFH,[J].JournaloftheScienceofFoodandAgriculture,2012,92(11):2394—2396.『3][J].同际中医中药杂志,2013,35(10):941—[J]InternationalJournalofTraditionalChineseMedicine,2013,35(10):941—943.(inChinese)『4]下敏,帅天罡,秦清娟,[J].食品科学,2016,37(7):197—。.一,。!j=|《援2023年第42卷第11期万方数据:..LIXiang,etal:annanonGenomeStabilityofHumanColonCelLinesWANGM,SHUAITG,QINQJ,[J].FoodScience,2016,37(7):197—203.(inChinese)[5]CHUAM,BALDWINTC,HOCKINGTJ,“[J].JournalofEthnopharmacology,2010,128(2):268—278.[6]林碉莹,[J].中同畜牧杂志,2021,57(12):37—,[J].ChineseJournalofAnimalScience,202l,57(12):37—41.(inChinese)[7]NALLESC,—versus—hostdisease[J].MucosalImmunology,2015,8(4):720—730.[8]NEGRlNIS,GORGOULISVG,--anevolvinghallmarkofcancer[J].NatureReviewsMolecularCellBiology,2010,1l(3):220—228.[9]SUROVAO,[J].Oncogene,2013,32(33):3789—3797.[10]SOUNNINE,[J].ClinicalChemistry,2013,59(1):85—93.[11]边亮,陈华围,[J].食品科学,2020,4

魔芋葡甘聚糖对人结肠细胞株基因组稳定性的影响 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

相关文档 更多>>
非法内容举报中心
文档信息
  • 页数8
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人小泥巴
  • 文件大小12.05 MB
  • 时间2024-03-27