卵裂期胚胎冻存及移植策略对解冻周期临床妊娠率和多胎率的影响.pdf

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】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。:..生殖医学杂志2023年7月第32卷第7期·1003·卵裂期胚胎冻存及移植策略对解冻周期临床妊娠率和多胎率的影响张小霞1,陈伟兰2#,李涛¨(;,广州510630)【摘要】目的探讨在目前冻融胚胎移植(FET)以单囊胚移植为主流的情况下,卵裂期胚胎(简称卵裂胚)的冻存与移植策略对FET周期临床妊娠率及多胎率的影响。方法回顾性分析2015年10月至2022年1月在我院生殖医学中心接受卵裂胚FET治疗的2544个周期的临床资料。按照胚胎培养情况分为两组:D3冷冻备份组(冷冻部分D3卵裂胚,作为囊胚培养的备份胚胎;竹一941)和D3全胚冷冻组(D3卵裂胚全部冷冻,无囊胚培养;n一1603)。又根据移植复苏卯裂胚的数量和质量不同分为5组:移植两枚优胚(A组)、移植1枚优胚+1枚非优胚(B组)、移植两枚非优胚(C组)、移植1枚优胚(D组)、移植1枚非优胚(E组);每组再根据患者年龄不同分为≤35岁和>35岁组。比较各组患者的一般资料及临床结局(种植率、临床妊娠率及多胎妊娠率等)。结果(1)D3冷冻备份组和D3全胚冷冻组不同移植策略亚组间获卵数、D3胚冷冻数存在显著性差异(P<)。D3冷冻备份组中A组临床妊娠率最高(%),显著高于c组(P<);D3全胚冷冻组中A组的临床妊娠率最高(%),显著高于C、D、E组(P<);D3冷冻备份组和D3全胚冷冻组中A、B、C组间多胎妊娠率比较无显著性差异(P>),单胚胎移植组((D、E组)的多胎妊娠率均为o%。(2)D3冷冻备份组≤35岁患者中,A组的临床妊娠率(%)显著高于c组和E组(P<);%,但与B、C组比较尚无显著性差异(P>)。D3冷冻备份组>35岁患者中,A组的临床妊娠率最高(4L4%),但与其他各组尚无显著性差异(P>);A、B、c组的多胎妊娠率亦无显著性差异(P>)。(3)D3全胚冷冻组≤35岁患者中,A组的临床妊娠率(%)显著高于其他各组(_P<);%,但与B、C组尚无显著性差异(P>)。D3全胚冷冻组>35岁患者中,A、B组的临床妊娠率(%、%)显著高于C、D、E组(P<),A、B、C组间多胎妊娠率亦无显著性差异(P>)。结论在单囊胚移植为主的FET周期中,影响卵裂胚移植临床妊娠率的主要因素是年龄、移植胚胎数和移植胚胎质量,而影响多胎妊娠率的主要因素是移植胚胎数。对于≤35岁患者,首选单个优胚冷冻和移植,可获得较满意的临床妊娠率,同时避免多胎妊娠;对于>35岁患者,因胚胎种植率降低,临床妊娠率低,尚无明确的临床证据支持首选单胚胎移植。【关键词】卵裂期胚胎;冻融胚胎移植;冷冻策略;临床妊娠率;多胎率【中图分类号】【文献标识码】AEffbctofcleaVagestageembryofreezingandtran_sferstrategyonpregnancyrateandmultiplebirthrateinfrozen—thawedcyclesZHANGXi缸。一zin1,CHEN—W台i—Z以n2#,LI丁no1’“czi铆PCg佗￡8r,:r^已T^irdA,一Zi以￡8矗Hospi￡nZo厂S“咒ya￡一5972U孢i口grsi￡y,G“口咒gz危o“￡7"B72￡o厂P矗Ⅱr,,z口cy,了流enirdA/≯￡i口比dH05pi￡口Zo,5甜咒Ya卜s8,zL7hi口gr正￡y,(洳ngz危o“510630【Abstract】Objective:Toinvestigatetheimpactofthecleavagestageembryosfreezingandtransferstrategyonthemultiplebirthrateandclinicalpregnancyrateinthecurrentsituationwherefrozen—thawedembryotransfer(FET)withsingleblastocysttransferwasthemainstream.【收稿日期】20zz一11—24;【修回日期】z023一01—18【基金项目】国家自然科学基金面上项目(82060176)【作者简介】张小霞,女,广东韶关人,学士,医学检验学专业.(8共同第一作者;’通讯作者)万方数据:..·1004·生堕匡堂苤查!!!!生!旦箜!;鲞箜!塑Methods:Theclinicaldataof2544FETcycleswithcleavagestageembryotransferinthereproductlVecenterofourhospitalfromOct。±embryoculture,theywerediVidedintotwogroups:theDay3freezingbackupgroup(±reezlngap。rtlon。±,咒一941)andtheDay3whoIeembryofree么nggroup(freezingalIDay3cIeavageembryosandnobIastocystcuIture,行=1603)·Eachgr。upwasfurtherdiVidedintofivesubgroupstothenumberandaccordingquaIityoftransterredcleaVageembryosafterthawed:twogood—qualityembryos(groupA),。negood—qualityembryoplusonenon—gO。d—qualItyembryo(groupB),twon。n~good—qualityembryos(groupC),onego。d—qualityembryo(groupD),andonenon—good—qualityembryo(gr。upE).Eachgroupwasfurtherdividedinto≤35一year一。ldand:>35一year—oldgroupsbased。,theclinicaIpregnancy。e(1mplantatlonrate,clinicalpregnancyrateandmultiplepregnancyrate):(1)ThenumbersofoocytesretrievedandDay3frozenembryosweresignificantlydifferentbetweentheDay3freezingbackupgroupandtheDay3wholeembryoInfreezinggroup(P<).theDay3freezingbackupgroup,theclinicalpregnancyrate(%)ofgroupAwas亡hehighes亡,whichwasslgm±1ca呲Iyhlgherthanthatingr。upC(P<).IntheDay3wh。leembry。freezinggroup,theclinicalpregnancyrate1ngroupAwasthehighest(%),whichwassignificantlyhigherthanthatinC,groupD,andE(P<O·05).TherewasnosignificantdifferenceinthemultiplepregnancyratebetweentheDav3±reezlngbackupgroupandtheDay3wholeembryofreezinggroup(P>),whilethemuItiplepregnancvrate1ntheslngleembry。transfergroup(groupD&E)was01dO%.(2)Am。ngpatients≤35yearsintheDay3±reezlngbackupgroup,theclinicalpregnancyrateingroupA(%)wassignificantlyhigherthanthatingr。upC&E(p<).%,butwasnoslgnmcantd1±±paredtogroupB&C(P>).Amongpatientsaged。ver35intheDav31reezlngbackupgroup,groupAhadthehighestclinicalpregnancyrate(%),buttherewasnoslgn1±1cantd1¨paredtoothergroups(P>).Therewasnosignificantdifferenceinthemul‘1plepregnancyrateamongthegroupA,BandC(P>).(3)Amongpatientsaged≤35yearsintheuay3wholeembryofreezinggroup,theclinicalpregnancyrateingroupA(%)wassignificantlyhigherthanthatlnothergr。ups(P<).Themultiplepregnancyrateingr。%,buttherewasnoslgnl±1cantdl±±paredtogroupsBandC(P>).theAmongpatientsagedover35yearsintheDay3wholeembry。freezinggroup,theclinicalpregnancyratesinAandB(%and27·3%,respectiVeIy)weresignificantlyhigherthanthoseingr。upC,D,andE(P<:),andtherewasnosignificantdifferenceinmultiplepregnancyratesamonggroupsA,B,andC(P>).Conclusions:IntheFETcycledominatedbysingleblastocysttransfer,themainfact。rstheaffectingclmlcalpregnancyrate。±cleaVageembryotransferareage,numberoftransferredofembryos,andqualitvtrans±erredembryos’whilethemainfactoraffectingthemultiplepregnancyrateisthenumberoftransierredembryos·P‘orpatients≤35yearsold,singleembryofreezingandtransplantati。nispreferredtoacnleVesatls±act。’duetothelowerembryoimplantationrateandclinicalpregnancyrate,:CleaVagestageembryo;Frozen—thawedembryotransfer;Cryopreservationstrategy;Clinicalpregnancyrate;Multiplepregnancyrate(JReprodMed2023,32(07).】003、1012)万方数据:..生殖医学杂志2023年7月第32卷第7期近年来IVF—ET助孕治疗中多胎妊娠率逐步降最终共纳入2544个周期。按照囊胚培养情况低,主要归功于囊胚培养及单囊胚移植在临床上的分为两组:D3冷冻备份组:行选择性第3天(D3)卵广泛应用。囊胚具有较高的种植潜力,单囊胚移植裂胚冷冻,即冷冻部分D3卵裂胚,作为囊胚培养的可以大幅降低多胎妊娠率,同时维持较高的临床妊备份胚胎,避免无可用囊胚形成导致无胚胎移植的娠率[1。3]。目前临床上的多胎妊娠主要来自移植2风险;未行囊胚培养组(D3全胚冷冻组):D3卵裂胚枚卵裂期胚胎(简称卵裂胚)的情况。由于卵裂胚总全部冷冻,元囊胚培养。又根据移植复苏卵裂胚质体种植率较低,如果行冻融卵裂胚移植,一般生殖中量不同分为5组:移植两枚优胚(A组)、移植1枚优心仍以移植2枚卵裂胚为主,导致临床上的多胎妊胚+1枚非优胚(B组)、移植两枚非优胚(C组)、移娠率较难得到进一步降低。植1枚优胚(D组)、移植1枚非优胚(E组)。每组冻融胚胎移植(FET)目前以囊胚培养、单囊胚再根据患者年龄不同分为≤35岁和>35岁组。移植为主,但临床工作中仍有一定比例的解冻卵裂二、促排卵及FET胚移植。卵裂胚移植主要适用于两类情况,一是卵采用本中心常规拮抗剂方案和黄体期长方案促巢反应差,所获胚胎数少,囊胚培养失败风险较高的排卵,当2~3个主导卵泡直径达18mm时,当日抽患者,多选择行新鲜或冻融卵裂胚移植;二是行囊胚血检查性激素(FSH、LH、E。、P)水平,皮下注射培养的患者,选择冻存1~2枚卵裂胚作为备份,防HCG(珠海丽珠制药)4000~10000U或者重组止无囊胚形成时元胚胎可移植,这类患者在囊胚培HCG(艾泽,默克雪兰诺,瑞士)250扯g扳机,于扳机养失败或囊胚已解冻完后,多选择冻融卵裂胚移植。后36~38h行取卵手术,扳机后39~42h进行因此,在目前以囊胚培养为主的情况下,本中心仍有IVF/ICSI受精。一定数量的冻融卵裂胚移植,这也是本中心FET周行FET前使用人工周期、自然周期方案准备内期多胎妊娠率的主要来源。膜。(1)人工周期方案适用于各种原因导致的低雌在辅助生殖技术(ART)治疗过程中,针对条件激素水平或无自然排卵的患者。从月经周期或撤退不同的患者有不同的冷冻策略选择,通常综合考虑出血的第1~3天起,口服戊酸雌二醇(补佳乐,拜女性年龄、胚胎质量及胚胎数量等[4]。为避免胚胎耳,德国)2~8mg/d,8~14d后根据B超检测的内反复冻融,冻存胚胎的模式(每管胚胎的数量与质量膜厚度,酌情调整药量;若内膜厚度<8mm或E。<评分)与移植胚胎数和移植胚胎质量直接相关,而冷200pg/m1(),加用芬吗通(雅培,美冻卵裂胚的模式与FET周期的妊娠率和多胎妊娠国)1~2mg***给药;当内膜厚度≥8mm或E。≥率密切相关。本研究回顾性分析2015年10月至200pg/ml()时,予肌肉注射黄体***2022年1月在我院生殖医学中心接受冻融卵裂胚(浙江仙琚制药)40~60mg或***给予黄体***软胶移植患者的临床资料,分析不同人群、不同年龄段的囊(安琪坦,Besins,法国)。内卵裂胚冻存及移植个数、移植胚胎质量对临床妊娠膜转化日后第4天移植复苏卵裂胚。(2)自然周期率和多胎妊娠率的影响,以期为不同患者选择更优方案适用于月经规律的患者。于月经周期第9~10的冷冻与移植策略提供参考,以获得满意的临床妊天开始行B超检查监测卵泡发育情况及内膜厚度,娠率,同时降低多胎妊娠率。当卵泡直径>14mm时,每天检测尿LH水平,同时抽血检测LH、E:及P水平;FET一般在LH峰资料与方法后的第3天或第5天进行,如B超监测发现内膜过一、研究对象与分组薄,建议下一周期采用人工周期方案准备内膜后再回顾性分析2015年10月至2022年1月在我行FET。院生殖医学中心接受卯裂胚FET治疗患者的临床三、胚胎质量评价及冷冻与复苏资料。纳入标准:卵裂胚FET周期;随访资料完整。:根据胚胎卵裂球数目、卵裂排除标准:存在子宫内膜炎、宫腔粘连、子宫畸形等球均一性及碎片量进行质量评价。工级:细胞大小宫腔疾病者;总解冻周期≥3次,移植两枚以上卵裂均匀,形状规则,透明带完整,胞质均匀清晰,无颗粒胚的解冻周期,晚补救周期或冻卵周期等特殊情况。现象,碎片<lO%;Ⅱ级:细胞大小略不均匀,形状略万方数据:..生殖医学杂志2023年7月第32卷第7期不规则,胞质可有颗粒现象,碎片量10%~25%;10U/L继续黄体支持,孕8周开始逐渐减量至孕Ⅲ级:细胞大小明显不均匀,胞质可有颗粒现象,碎10周停药。片量25%~50%。如D3胚胎卵裂球数≤4个,:胚胎移植后14d检测血清pHCG片量25%~50%时,为不可利用胚胎;如卵裂球数水平,当血清8一HCG≥10U/L为HCG阳性;胚胎目6~10个,碎片量<10%,细胞大小均匀,形状规移植后4~5周经***超声检查见孕囊及胎心搏则时,为优质卵裂胚。动者确定为临床妊娠。:胚胎冷冻及解冻液活产。体均购自日本Kitazato公司。胚胎冷冻流程:室温五、统计学方法下将胚胎移置平衡液中10min,,冻液中1min,剩余20s时迅速将胚胎放置冷冻载计量资料服从正态分布者用均数±标准差(互±s)表体尖端,投入液氮中。解冻时需核对冷冻标签中患示;非正态分布资料以中位数(四分位间距)[M(P扪者姓名、胚胎个数、胚胎阶段、冷冻日期,将胚胎迅速P,。)]表示。方差齐性数据组间比较采用单因素浸入37℃解冻液中1min,后依次将胚胎转移置ANOVA检验,方差不齐数据组间比较采用非参数WS2液(室温3min)、WS3液(室温5min)及WS4检验。计数资料以率(%)表示,组间比较采用卡方液(室温6min),最后转移至含G2一Plus液检验。P<。(vitr01ife,瑞典)的3037皿中等待移植。至少一半结果卵裂球复苏为胚胎存活。四、黄体支持、妊娠情况判断一、::共941个周期,其中移植两黄体支持,自然周期于确认排卵后进行黄体支持。枚优胚(A组)384个周期,移植l枚优胚+1枚非优均使用口服地屈孕***片(达芙通,雅培,美国)胚(B组)306个周期,移植两枚非优胚(C组)168个lomg/次,2次/d。根据患者情况肌肉注射黄体***周期,移植1枚优胚(D组)61个周期,移植1枚非针剂(浙江仙琚制药)40mg,1次/d,或***给予黄优胚(E组)22个周期。各组间患者年龄、体质量指体***胶囊(安琪坦,Besins,西班牙),数(BMI)、基础FSH水平、不孕年限比较均无显著2次/d,或***给予8%黄体***缓释凝胶(雪诺同,默性差异(P>),而获卵数、D3胚冷冻数和总冷克雪兰诺,德国)90mg,1次/d。胚胎移植后维持剂冻数(D3胚冷冻数+囊胚冷冻数)组间比较有显著量不变,直到抽血检测血p—HCG值。若口一HCG≥性差异(P<)(表1)。表lD3冷冻备份组中各亚组的一般资料比较[(i士s),M(P:。,P,。)]注:各组间整体比较,。P<。:共1603个周期,其中移植非优胚(E组)105个周期。各组间患者BMI、不孕两枚优胚(A组)491个周期,移植1枚优胚+1枚非年限比较无显著性差异(P>),而组间年龄、基优胚(B组)440个周期,移植两枚非优胚(C组)324础FSH水平、获卵数、D3冷冻数比较有显著性差异个周期,移植1枚优胚(D组)243个周期,移植1枚(P<)(表2)。万方数据:..生殖医学杂志2023年7月第32卷第7期二、临床结局比较D3全胚冷冻组中A组临床妊娠率最高,其次D3冷冻备份组中A组临床妊娠率最高,但与B是B组,A、B组比较无显著性差异(P>),但A组、D组及E组比较尚无显著性差异(P>),仅组显著高于C、D、E组(P<);移植两枚胚胎的显著高于C组(P<);移植两枚胚胎的各组各组(A、B、C组)问多胎妊娠率无显著性差异(P>(A、B、C组)多胎妊娠率比较无显著性差异(P>),单胚胎移植(D组和E组)),单胚胎移植(D组和E组)的多胎妊娠率为o%;5个亚组间异位妊娠率元显著性差异(P>0%;5个亚组间异位妊娠率比较无显著性差异(P>);A组的种植率数值最高,显著高于C组、);A组种植率显著高于c组(P<),但与组(P<),但与B组、D组比较尚元显著性差异B、D、E组无显著性差异(P>)(表3)。(P>)(表4)。表2D3全胚冷冻组中各亚组的一般资料比较[(i士5),M(P。。,P,5)]注:与A组比较,‘P<。三、:D3冷冻备份组中≤35岁患差异。A组临床妊娠率最高,但B组、D组的临床万方数据:..生殖医学杂志2023年7月第32卷第7期妊娠率与之比较无显著性差异(P>);无优胚移植1枚胚胎(D组和E组)的临床妊娠率更低,但移植组(C组和E组)的临床妊娠率则显著低于A因周期数很少,无明确的临床意义;A组的临床妊组(P<)。移植两枚胚胎(A、B、C组)的多胎娠率数值最高,但与B组和C组比较无显著性差异妊娠率较高,但组间无显著性差异(P>)。D3(P>);移植两枚胚胎(A、B、C组)的多胎妊娠冷冻备份组中>35岁患者的临床妊娠率整体偏低,率组间比较无显著性差异(尸>)。详见表5。表5D3冷冻备份组中各亚组临床妊娠率、多胎妊娠率的二分类Logistic回归分析注:~不适用;与同年龄段内A组比较,’P<。:D3全胚冷冻组中≤%;移植两枚胚胎(A、B、C患者5种不同移植策略亚组的临床妊娠率间有较组)的多胎妊娠率组间比较无显著性差异(P>为明显差异,)。D3全胚冷冻组中>35岁患者的临床妊娠优胚数有密切关系。A组的临床妊娠率最高,显率整体进一步降低,临床妊娠率与移植胚胎数有著高于B组(P<);C组和D组的临床妊娠率密切关系。移植两枚胚胎(A、B、C组)的临床妊娠相似,与A组比较均进一步降低(P<);E组率显著高于移植1枚胚胎(D组和E组)(P<万方数据:..生殖医学杂志2023年7月第32卷第7期·1009·);与A组比较,B组和C组的临床妊娠率无组)的多胎妊娠率组间比较无显著性差异(P>显著性差异(P>);移植两枚胚胎(A、B、)。详见表6。表6D3全胚冷冻组中各亚组临床妊娠率、多胎妊娠率的二分类Logistic回归分析(%)组别周期数临床妊娠率(%)0R(95%cI)P值≤(132/212)(100/202)。O,594(,)(62/166)+(,)<(28/80)+(。)<(6/43)’(,)<>(73/279)(65/238)(,)(31/158)(,)(28/163)#(,)(7/62)(,)(%)0R(95%CDP值注:一不适用;与同年龄段内A组比较,甲<;与同年龄段内A、B、C组比较,8P<。研究对象,分析移植卵裂胚的数量和质量对临床妊讨论娠率和多胎妊娠率的影响,以及在不同人群中维持随着体外培养技术的不断进步,越来越多的中临床妊娠率的同时降低多胎妊娠率的卵裂胚冷冻/心开始常态化的选择进行囊胚培养[5。6]。囊胚培养、移植策略。囊胚移植的主要目的是通过胚胎选择,实现单囊胚目前的胚胎体外环境尚不能保持完全稳定、完移植,维持妊娠率的同时避免多胎妊娠,因此目前总善的状态[7-8],可能受到一些外界因素的影响,故延体解冻周期的多胎妊娠率主要来自卵裂胚移植周长胚胎培养到囊胚阶段存在一定的培养风险;其次,期;此外,随着胚胎全冻策略的应用,解冻移植周期早期胚胎的发育主要反映卵子的质量,胚胎自身的的比例逐渐增加。本研究以解冻卵裂胚移植周期为基因组在6至8细胞阶段时才开始激活,D3胚胎评万方数据:..生殖医学杂志2023年7月第32卷第7期分不能完全预测后续囊胚的发育。因此,为减轻患义。移植2枚优胚的临床妊娠率数值最高,降低移者的心理负担,本中心常规为囊胚培养的患者冻存植胚胎质量后临床妊娠率逐步降低,移植1枚优胚1至2枚卵裂胚,其余行囊胚培养,单囊胚冻存两支+l枚非优胚的临床妊娠率高于移植2枚非优胚,及以上麦管,解冻周期时优先选择单囊胚移植。此虽然尚无显著性差异(P>);但是,当移植2枚种情况下部分患者因移植囊胚未妊娠或个人原因,卵裂胚时,无论移植胚胎质量如何,各亚组间多胎妊解冻周期选择解冻移植D3备份的卯裂胚。另一方娠率元显著性差异(P>)。考虑到>35岁患者面,由于目前的体外培养环境尚不能完全模拟体内囊胚形成率降低,囊胚培养的风险增加,因此对于>环境,不能排除某些胚胎在体外培养时不能发育到35岁D3冷冻备份组的患者,建议选择性冻存两枚囊胚,而移植到体内仍有继续发育、种植的机会。因胚胎,至少包括1枚优胚,以维持相对满意的临床妊此,对于D3胚胎数量少的患者,选择D3胚胎全冻娠率。和卵裂期胚胎移植可以增加胚胎移植和妊娠的D3胚胎全冻的患者,主要是卵巢储备差、可用机会。胚胎少的人群。这部分患者胚胎个数少,行囊胚培与单囊胚移植不同,由于D3卵裂胚的种植率养的风险很高,全部胚胎均在卵裂期阶段移植。临较低,通常一管冻存两枚卵裂胚,解冻后移植两枚卵床上比较关注冷冻时胚胎的搭配,提高每移植周期裂胚,这是解冻卵裂胚移植周期多胎妊娠高的主要的临床妊娠率,同时也希望增加优胚的移植次数,提原因口。叩;如何根据胚胎情况,结合患者的自身因高累积妊娠率。本研究数据显示,此组年轻的(≤35素,选择适宜的卵裂胚冻存模式,即每管冷冻卵裂胚岁)D3胚全冻的患者,单胚胎冷冻与移植的例数较的数目和不同质量评分的胚胎搭配冷冻,以在维持少,可能也与患者每取卯周期的获卵数较少有关,此临床妊娠率的同时降低多胎妊娠率,是目前本中心组患者的临床妊娠率与移植胚胎的质量及移植胚胎IVF实验室关注的重点。本研究结果显示,对于以数紧密相关。随着胚胎质量降低及移植胚胎数减囊胚培养为目的,D3冷冻1至2枚卯裂胚备份的患少,各组的临床妊娠率呈下降趋势。移植1枚优胚者,尤其是≤35岁的年轻患者,卵巢储备较好、获卵无多胎妊娠发生,临床妊娠率显著低于移植2枚优较多,总体胚胎质量好。即使患者有囊胚移植失败胚和1枚优胚+1枚非优胚(P<);与移植2枚史,%,非优胚比较无显著性差异(P>);移植1枚非与单囊胚移植的妊娠率相似,但是